Análise da atividade antioxidante e do efeito na mortalidade de artêmia dos extratos de espécies de annonaceae nativas do cerrado

• Processo: 15/01664-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2015
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Botânica - Botânica Aplicada
• Pesquisador responsável: Déborah Yara Alves Cursino dos Santos
• Beneficiário: Maria Goreti de Oliveira
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/07543-0 - Atividades pesticida de acetogeninas de espécies de Annonaceae nativas do Cerrado, AP.R
• Assunto(s): Xylopia aromatica Citotoxicidade Annonaceae Antioxidantes Acetogeninas Fitoquímica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Acetogeninas | Annona coriacea | Annonaceae | Antioxidantes | Atividade Citotóxica | Xylopia aromatica | Fitoquímica

Resumo

Dentre as espécies mais comuns de Annonaceae no cerrado estão Annona coriacea Mart., A. crassiflora Mart., A. dioica A. St.-Hil., Duguetia furfuracea (A. St.-Hil.) Saff. e Xylopia aromatica (Lam.) Mart. (Batalha & Mantovani, 2001). Durante o primeiro ano de desenvolvimento do projeto de auxílio (2013/07543-0), os resultados obtidos com diversos ensaios biológicos foram bastante interessantes, incluindo alguns não previstos no projeto original. Com isso, o objetivo principal deste projeto é o aprofundamento na execução dos bioensaios, com a análise do potencial citotóxico frente às artêmias e antioxidante, utilizando as frações e/ou substâncias isoladas dos extratos obtidos de caules e folhas de Annona coriacea Mart., A. crassiflora Mart., A. dioica A. St.-Hil., Duguetia furfuracea (A. St.-Hil.) Saff. e Xylopia aromatica Lam. Mart.. Os materiais serão extraídos em álcool etílico e depois fracionados em colunas de cromatografia contendo sílica gel como fase estacionária e por HPLC de coluna semi-preparativa. A elucidação estrutural será feita por técnicas de espectrometria usuais. O ensaio da mortalidade de artêmias pode ser usado para avaliar tanto a atividade inseticida como citotóxica dos extratos, sendo considerado uma forma mais simples e barata de selecionar extratos para futuros ensaios de atividades antiproliferativas. As concentrações utilizadas dos extratos, frações e/ou substâncias isoladas serão de 15,62 a 1000 µg mL-1, dissolvidos previamente em DMSO 2%. Primeiramente, cistos de artêmias serão eclodidos em água salina estéril (32 u.p.s.) sob aeração forte e constante, temperatura de 25 °C e iluminação de 100 µmol m-2 s-1. Após 48 horas, cerca de 10-15 naúplios serão transferidos para os poços de uma placa de 96 poços. Em cada poço serão adicionados 100 µL de cada um dos extratos em diferentes concentrações. O controle negativo será feito com água salina estéril e DMSO (2%) e o controle positivo com nitrato de potássio nas mesmas concentrações dos extratos. A mortalidade dos naúplios será avaliada 24 horas após a montagem das placas. A análise do potencial antioxidante será feita por meio de espectrofotometria empregando, pelo menos, duas metodologias distintas: redução do radical livre DPPH (2,2-difenil-1-picril-hidrazil) e o método da descoloração ou oxidação do ²-caroteno através do sistema b-caroteno/ácido linoleico. Em ambos os protocolos, as amostras serão dissolvidas em metanol e diluídas em concentrações entre 0,1 - 2,0 mg/mL. A atividade de sequestro de DPPH será determinada de acordo com o método descrito por Rufino et al. (2007) com modificações. Alíquotas (200 µL) das amostras diluídas em metanol são misturadas a 20 µL de solução metanólica de DPPH (0,2 mM) em microplaca de 96 poços. Após incubação da microplaca por 20 min a temperatura ambiente e protegida da luz, a absorbância é lida a 515 nm em equipamento EPOCH. Serão utilizadas como controle positivo, soluções metanólicas de quercetina (10 a 200 ¼g mL-1). Para o sistema b-caroteno/ácido linoleico, adiciona-se 100 µL das amostras diluídas em 200 µL da solução b-caroteno/ácido linoleico. Esta solução será preparada com 45 µg de ²-caroteno previamente descristalizado em diclorometano, 40 µL de ácido linoleico, 400 mg de Tween 40 e 50 mL de água saturada com oxigênio. As leituras também serão realizadas em leitor de ELISA com medições entre 0 - 120 min em intervalos de 10 min em »=458 nm.