Validação de genes de referência para real-time PCR em células osteoblásticas provenientes de medula óssea de rato

• Processo: 15/05376-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2015
• Data de Término da vigência: 25 de julho de 2016
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Cirurgia Buco-maxilo-facial
• Pesquisador responsável: Adalberto Luiz Rosa
• Beneficiário: Jaqueline Isadora Reis Ramos
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia molecular Cirurgia bucomaxilofacial Medula óssea Expressão gênica Cultura de células Osteoblastos Medula óssea de animal Reação em cadeia da polimerase em tempo real
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biologia molecular | cultura de células | expressão gênica | Medula Óssea | osteoblastos | Real-Time PCR | Cirurgia Buco-Maxilo-Facial

Resumo

A técnica de Real-time PCR é um dos métodos de escolha para o estudo da expressão de genes envolvidos no processo de diferenciação dos osteoblastos em função de sua reprodutibilidade e facilidade de execução. A normalização dos dados dos genes de interesse em relação a genes de referência é fundamental para minimizar possíveis diferenças advindas de variações da técnica. Os genes de referência devem apresentar expressão constante ao longo dos diversos estágios de diferenciação celular. Diante disso, o objetivo deste projeto é avaliar a expressão de 32 genes de referência em células osteoblásticas provenientes de medula óssea de rato aos 4, 7 10, 12 e 14 dias para determinar quais são os mais estáveis nesse modelo de cultura. Os dados de ciclo limiar (Ct) de todos os genes e períodos serão analisados por meio do software Expression Suit que gera um valor de score indicativo da estabilidade de expressão do gene de referência durante a diferenciação osteoblástica. Para monitorar o crescimento das culturas, será avaliada a proliferação celular aos 4, 7 e 10 dias. Para a caracterização dos genótipo e fenótipo osteoblásticos serão avaliadas a expressão gênica de Runx2, fosfatase alcalina (ALP) e osteocalcina aos 4, 7 e 10 dias, a atividade da enzima ALP aos 10 dias e a formação de matriz mineralizada aos 21 dias. Os dados obtidos serão submetidos aos testes de análise de variância ou Kruskall-Wallis, quando apropriado.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ABUNA, RODRIGO P. F.; OLIVEIRA, FABIOLA S.; RAMOS, JAQUELINE I. R.; LOPES, HELENA B.; FREITAS, GILEADE P.; SOUZA, ALANN T. P.; BELOTI, MARCIO M.; ROSA, ADALBERTO L.. Selection of reference genes for quantitative real-time polymerase chain reaction studies in rat osteoblasts. Journal of Cellular Physiology, v. 234, n. 1, p. 749-756, JAN 2019. (15/05376-4)