Validação de kit para método rápido de quantificação de leveduras ativas durante o processo fermentativo em fermentações industriais

• Processo: 16/22623-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2016
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2017
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
• Pesquisador responsável: Pilar Rodriguez de Massaguer
• Beneficiário: Ana Carolina Bortolossi Rezende de Carvalho
• Vinculado ao auxílio: 15/22699-1 - Validação de kit para método rápido de quantificação de leveduras ativas durante o processo fermentativo em fermentações industriais, AP.PIPE
• Assunto(s): Microbiologia de alimentos Fermentação alcoólica Fluorometria Leveduras
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Análises fluorimétricas | Fermentação Alcóólica | quantificação de leveduras | viabilidade de leveduras | Microbiologia de Alimentos

Resumo

A performance e atividade das leveduras é crítica na indústria de produção de etanol. Por esta razão, métodos rápidos e precisos, que analisam a viabilidade de leveduras durante a fermentação são elementos essenciais neste processo. Sendo assim, a presente pesquisa terá por objetivo: validar a utilização de soluções formuladas pelo LABTERMO, com reagentes adquiridos no mercado local, utilizadas na leitura fluorimétrica da viabilidade das leveduras em soluções, em escala laboratorial e em escala industrial. Em ambas as escalas, a levedura utilizada será a Saccharomyces cerevisiae. Em intervalos de tempo pré-determinados, alíquotas serão retiradas durante o processo fermentativo e as contagens realizadas por quatro métodos distintos: A. contagem em hemacitômetro utilizando a coloração com azul de metileno; B. contagem padrão em placas - utilizando método específico para contagem de bolores e leveduras; C. Inicialmente havíamos planejado a determinação do número de células ativas utilizando medidas fluorimétricas mediante o método Easy Count (YAM) com kit importado, porém devido a impossibilidade da aquisição do sistema YAM (Nalco) utilizaremos como padrão as medidas de viabilidade pelo sistema LUNA-FL D. determinação do número de células ativas utilizando leituras fluorimétricas com kit formulado pelo LABTERMO. Na escala laboratorial, a fermentação será conduzida em erlenmayer de 300mL com 150mL de mosto estéril, com pH e °Brix padronizados, inoculados com 5mL de suspensão de células vegetativas da levedura, atingindo concentração final de ~10 a 6 UFC/mL. A fermentação será conduzida a 32°C e as amostras serão coletadas a cada 30 minutos por 7h. Já na escala industrial, as amostras serão coletadas durante um ciclo típico de fermentação e a viabilidade monitorada até o final da fermentação. Cada amostra coletada será submetida a contagem de células viáveis pelos 4 métodos descritos anteriormente. As contagens realizadas pelos métodos tradicionais (coloração com azul de metileno e contagem em placas) serão conduzidas em duplicata e por dois analistas diferenciados. Nas contagens realizadas pelo método o LUNA-FL (kit importado ou formulado nacional), para cada amostra, cada analista fará 10 repetições a cada intervalo de coleta. Os erros e desvios padrão dos resultados de cada leitura, entre os analistas e para cada método serão analisados estatisticamente. Esta será uma forma de validar o método proposto com os kits formulados pelo LABTERMO versus o método com que utiliza o kit LUNA-FL importado. Para esta validação, o método com menor erro e desvio padrão entre operadores será estabelecido como o de melhor performance. Através dos resultados obtidos poderá ser validada a utilização do LUNA-FL, com os kits formulados pelo LABTERMO para posterior comercialização, a um preço muito mais reduzido. A demanda por este tipo de método é grande nas indústrias de fermentações alcoólicas, pois, quanto mais rápida for constatada a queda na viabilidade mais rapidamente o problema poderá ser corrigido. (AU)