Técnicas para avaliação da morfologia e viabilidade de tecido reprodutivo feminino como ferramentas para auxiliar na pesquisa do câncer

• Processo: 16/22947-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2017
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2018
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Histologia
• Pesquisador responsável: Sebastião Roberto Taboga
• Beneficiário: Ellen Cristina Rivas Leonel
• Supervisor: Christiani Andrade Amorim
• Instituição Sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Universitè Catolique de Louvain (UCL), Bélgica
• Vinculado à bolsa: 15/01548-5 - Avaliação do efeito carcinogênico do Bisfenol-A na glândula mamária de fêmeas do gerbilo da Mongólia (Meriones unguiculatus), BP.DR
• Assunto(s): Imuno-histoquímica Glândulas mamárias Ovário Neoplasias Biologia molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biologia molecular | câncer | Glândula mamária | imunohistoquimica | Ovário | transplante ovariano | Histomorfologia e Biologia Molecular

Resumo

A incidência de câncer tem crescido nas últimas décadas. O desenvolvimento de novos estudos em prevenção e tratamento para estas doenças tem motivado inúmeros grupos de pesquisa ao redor do mundo. Mesmo assim, o conhecimento sobre etiologia ainda é escasso e tratamentos já estabelecidos são conhecidos por causar vários efeitos colaterais em pacientes, especialmente nas gônadas. As mulheres submetidas à quimioterapia podem desenvolver disfunção das gônadas, tornarem-se inférteis e exibirem menopausa iatrogênica ou induzida. Para esses pacientes, as biotecnologias reprodutivas, como a criopreservação e transplante de tecido ovariano, são uma fonte interessante para auxiliar na retomada da função das gônadas e recuperar a fertilidade. Dessa forma, os objetivos deste projeto de estágio são: 1) realizar imunohistoquímica e western blotting em tecido mamário e ovariano de gerbil, obtido a partir dos experimentos desenvolvidos durante o doutorado na UNESP e; 2) participar em um novo projeto extra, elaborado pelo GYNE / IREC / UCL e ganhar experiência em técnicas como criopreservação de tecidos, avaliação de ultraestrutura com microscopia eletrônica de transmissão (MET), tomografia computadorizada de raios X, cultura de tecido in vitro e in vivo com tecido ovariano humano e bovino após criopreservação. Para a glândula mamária do gerbil e tecido ovariano, já obtidos na UNESP, será desenvolvida a imuno-histoquímica de dupla marcação para alguns marcadores não disponíveis em nossa instituição e já desenvolvidos no IREC, como Cx43 e KI67. Pretende-se também realizar a técnica de western blotting no tecido da glândula mamária do gerbil para a detecção da proteína EZH2 e Esr-1. Além dessa complementação do projeto de doutorado, será desenvolvido um experimento para estabelecer um protocolo de vitrificação do tecido ovariano. Primeiramente, um teste será realizado em ovários bovinos, que serão descongelados, cultivados in vitro e transplantados para camundongos Nude. Como segunda parte do experimento, biópsias ovarianas humanas serão obtidas de pacientes para comparar o novo protocolo de vitrificação a um método de congelamento lento. Posteriormente, os fragmentos de tecido aquecidos ou descongelados serão xenotransplantados para camundongos Nude durante 6 meses. A avaliação do tecido ovariano enxertado incluirá tomografia computadorizada de raio-X para certificar a perfusão de crioprotetor antes da vitrificação; imuno-histoquímica para proliferação (KI67), apoptose (TUNEL e caspase-3 activa), vascularização (CD-34) e detecção de antígenos de maturação de vasos (±-ASMA); e MET para integridade de membrana e avaliação de lisossomos. O desenvolvimento de todas as técnicas aqui propostas deve contribuir para a melhoria das nossas capacidades laboratoriais e consequentemente a qualidade e visibilidade das publicações. Permitirá também o estabelecimento de um novo campo de pesquisa em nosso grupo, como a morfologia do trato reprodutivo feminino.

Publicações científicas

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(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

RIVAS LEONEL, ELLEN CRISTINA; CORRAL, ARIADNA; RISCO, RAMON; CAMBONI, ALESSANDRA; TABOGA, SEBASTIAO ROBERTO; KILBRIDE, PETER; VAZQUEZ, MARINA; MORRIS, JOHN; DOLMANS, MARIE-MADELEINE; AMORIM, CHRISTIANI A.. Stepped vitrification technique for human ovarian tissue cryopreservation. SCIENTIFIC REPORTS, v. 9, DEC 27 2019. (16/22947-8)

RIVAS LEONEL, ELLEN CRISTINA; LUCCI, CAROLINA M.; AMORIM, CHRISTIANI A.. Cryopreservation of Human Ovarian Tissue: A Review. TRANSFUSION MEDICINE AND HEMOTHERAPY, v. 46, n. 3, p. 173-181, 2019. (16/22947-8)

AMORIM, CHRISTIANI A.; RIVAS LEONEL, ELLEN CRISTINA; AFIFI, YOUSRI; COOMARASAMY, ARRI; FISHEL, SIMON. Cryostorage and retransplantation of ovarian tissue as an infertility treatment. BEST PRACTICE & RESEARCH CLINICAL ENDOCRINOLOGY & METABOLISM, v. 33, n. 1, p. 89-102, FEB 2019. (16/22947-8)

RIVAS LEONEL, ELLEN CRISTINA; PEGORIN CAMPOS, SILVANA GISELE; ALVES GUERRA, LUIZ HENRIQUE; BEDOLO, CAROLINA MARQUES; LEITE VILAMAIOR, PATRICIA SIMONE; CALMON, MARILIA FREITAS; RAHAL, PAULA; AMORIM, CHRISTIANI ANDRADE; TABOGA, SEBASTIDO ROBERTO. Impact of perinatal bisphenol A and 17 beta estradiol exposure: Comparing hormone receptor response. ECOTOXICOLOGY AND ENVIRONMENTAL SAFETY, v. 188, JAN 30 2020. (15/01548-5, 16/22947-8)

ASIABI, P.; LEONEL, E. C. R.; MARBAIX, E.; DOLMANS, M. M.; AMORIM, C. A.. Immunodetection and quantification of enzymatic markers in theca cells: the early process of ovarian steroidogenesis. BIOLOGY OF REPRODUCTION, v. 102, n. 1, p. 145-155, JAN 2020. (16/22947-8)

RIVAS LEONEL, ELLEN CRISTINA; PEGORIN CAMPOS, SILVANA GISELE; BARALDI BEDOLO, CAROLINA MARQUES; ALVES GUERRA, LUIZ HENRIQUE; LEITE VILAMAIOR, PATRICIA SIMONE; CALMON, MARILIA FREITAS; RAHAL, PAULA; AMORIM, CHRISTIANI ANDRADE; TABOGA, SEBASTIAO ROBERTO. Perinatal exposure to bisphenol A impacts in the mammary gland morphology of adult Mongolian gerbils. Experimental and Molecular Pathology, v. 113, APR 2020. (15/01548-5, 16/22947-8)