Frequência de mutantes PHOconstitutivos: influência do meio de cultura e de seus tampões

• Processo: 16/23981-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2017
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Beny Spira
• Beneficiário: Gabriella Trombini Machado
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Genética bacteriana Mutação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: glicerol-2-fosfato | meio de cultura e tampão | Mutações adaptativas | mutantes phoA- | mutantes PHO-constitutivos | Tris | Genética Bacteriana

Resumo

Mutantes PHOconstitutivos são caracterizados por perderem a capacidade de regular a expressão do regulon PHO em ambientes com excesso de fosfato inorgânico. Tais mutantes são isolados em meio mínimo contendo glicerol2fosfato (G2P) como fonte de carbono e usualmente tamponado com Tris. O surgimento desses mutantes obedece a um padrão típico de mutantes adaptativos. A frequência real de mutantes PHO-constitutivos é em torno de 107 108 mutações/célula/geração. Tendo em vista que o fenótipo PHOconstitutivo decorre da perda de função de proteínas regulatórias e que tais mutações podem ocorrer em 6 genes distintos, a frequência observada desses mutantes é muito baixa. O objetivo desse projeto é avaliar o motivo desta baixa frequência de mutantes PHOconstitutivos. Uma hipótese é que o surgimento desses mutantes está sendo inibido por efeitos tóxicos do tampão utilizado no meio de cultura, causando inibição do crescimento ou morte celular. Para testar esta hipótese, será avaliada a viabilidade e a sobrevivência das bactérias no meio de cultura e o efeito de diferentes tampões sobre a frequência de mutantes PHOconstitutivos. A dinâmica do surgimento de mutantes em outros sistemas, como seleção de mutantes phoA e mutantes resistentes a antibióticos, também será avaliada. (AU)