Padronização e validação de ensaio imunoenzimático para quantificação do hormônio luteinizante para a espécie bovina

• Processo: 17/02193-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2017
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2018
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Guilherme de Paula Nogueira
• Beneficiário: Francine Rodrigues Navarro
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária (FMVA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba , SP, Brasil
• Assunto(s): Biotinilação Glicoproteínas Ensaio de imunoadsorção enzimática Hormônio luteinizante
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biotinilação | Elisa | Ensaio competitivo | glicoproteínas | Quantificação hormonal

Resumo

Em virtude da reconhecida participação do hormônio luteinizante (LH) nos processos reprodutivos, diferentes metodologias vêm sendo desenvolvidas para quantificar essa gonadotrofina. O objetivo do presente estudo é padronizar e validar um ensaio imunoenzimático (ELISA) para a quantificação do LH bovino, por meio, do sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase em um ensaio competitivo. Para isso serão realizados testes de ligação para avaliar a melhor combinação entre a concentração do anticorpo específico, anticorpo de captura e b-LH biotinilado que resultem em densidade óptica próxima a 1,0. Após essa triagem serão iniciados os testes apenas com a curva padrão, a fim de estabelecer o melhor diluente para elaboração das soluções padrão, os tempos de incubação, a temperatura e as lavagens entre cada etapa. Posteriormente, a metodologia será aplicada em amostras de plasma coletadas de bovinos em diferentes estágios de desenvolvimento (bezerras, novilhas e vacas) e as concentrações de b-LH resultantes do método em desenvolvimento serão comparadas com as obtidas por radioimunoensaio (RIA). Por fim, o método será submetido à procedimentos de validação como exatidão, precisão, sensibilidade, limite de quantificação inferior e linearidade, sendo estes testes realizados em quadruplicata em 8 ensaios independentes. O programa a ser utilizado para realização dos cálculos de regressão linear e não linear das curvas padrão e as correlações entre as doses obtidas por ELISA e RIA serão efetuados no GraphPad Prism, versão 6.0 para Windows. (AU)