Quantificação do efeito do espaçamento entre as regiões -35/-10 em promotores sintéticos bacterianos

• Processo: 18/08607-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2018
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Rafael Silva Rocha
• Beneficiário: Marina Storti Corbani
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 12/22921-8 - Abordagens de biologia sintética para decifrar os mecanismos de integração de sinais em promotores bacterianos complexos, AP.JP
• Assunto(s): Biologia sistêmica Biologia sintética Regulação da expressão gênica Redes complexas Plasmídeos Análise de sequência de DNA RNA polimerases Fator sigma
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biologia sistêmica | Engenharia de promotores | Redes Complexas | Regulação gênica | Biologia Sintética

Resumo

Neste trabalho, pretendemos investigar o efeito do espaçamento entras as regiões reconhecidas pela RNA polimerase bacteriana em conjunto com o fator sigma70. Enquanto que muitos trabalhos na literatura têm investigado o efeito das sequências contidas nas caixas -35/-10 na atividade final dos promotores, poucos estudos visam caracterizar de maneira sistemática o efeito do espaçamento entre essas caixas na atividade promotora. No presente plano de trabalho, serão construídas quatro variantes de promotores sintéticos constitutivos (baseados nos promotores PJ100, PJ106, PJ114 e PJ113) contendo um espaçamento entre as caixas -35/-10 variando de 15 a 19 pb. Os 16 promotores resultantes serão clonados em um plasmídeo contendo o gene repórter GFPlva e analisados em uma linhagem selvagem de E. coli. Os dados gerados serão integrados com outros existentes no laboratório para a construção de um modelo de força de promotor baseado na sequência de DNA. (AU)