Comparando e aprimorando as técnicas para ensaios de progesterona e estradiol usando amostras plasmáticas bovinas de experimentos prévios que avaliaram a influência desses esteróides na espessura endometrial

• Processo: 18/09266-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Mestrado
• Data de Início da vigência: 20 de agosto de 2018
• Data de Término da vigência: 19 de fevereiro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Roberto Sartori Filho
• Beneficiário: Jéssica Cristina Lemos Motta
• Supervisor: Milo Wiltbank
• Instituição Sede: Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Wisconsin-Madison (UW-Madison), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 17/16701-9 - Influência das concentrações circulantes de estradiol e progesterona sobre a espessura endometrial e as concentrações de LH e FSH após tratamento com GnRH, BP.MS
• Assunto(s): Radioimunoensaio Traçadores radioativos Ensaio de imunoadsorção enzimática Quimiluminescência Progesterona Estradiol
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Elisa | Fsh | Lh | quimiluminescência | radioimonoensaio | Dosagem laboratorial de hormônios

Resumo

O radioimunoensaio (RIE) é amplamente utilizado para análises de concentrações hormonais e apresenta alta especificidade e sensibilidade. No entanto, este método requer o uso de marcadores radioativas, que podem ser prejudiciais para os operadores e exigem o descarte adequado dos reagentes, a fim de evitar a poluição de natureza radioativa. Além disso, os reagentes utilizados neste método apresentam um prazo de validade curto e a sua importação é um processo laborioso, dispendioso e lento. Portanto, é relevante estudar e aperfeiçoar métodos alternativos que possam substituir o RIE quando necessário. Para tanto, no primeiro experimento, um total de 400 amostras de plasma serão analisadas quanto à concentração de progesterona por RIE (ImmuChem Progesterone CT, 07-270105, MP Biomedicals, Santa Ana, CA). Em seguida, metade das mesmas amostras (n = 200) serão submetidas ao ensaio de quimioluminescência (Immulite comercial kit) e a outra metade ao ensaio imunoenzimático Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Um segundo experimento será desenvolvido na tentativa de solucionar outro problema relacionado ao RIE. Embora este ensaio seja eficiente na análise das concentrações hormonais, para o estradiol bovino não há disponibilidade de kits confiáveis disponível atualmente. Assim, o experimento seguinte avaliará uma técnica de RIE "hand-made" para análises das concentrações circulantes de estradiol bovino (n = 600 amostras), usando E2-I125 (Cat 07-138226 - MP Biomedicals) e Anti-E2 (Cat 07-138216 MP), adaptando um protocolo já disponível na literatura. Todas as amostras que serão utilizadas neste projeto são de três experimentos anteriores desenvolvidos no Brasil e financiados pela FAPESP (2017/16701-9), utilizando vacas Holandesas não-lactantes como modelo. Finalmente, simultaneamente aos ensaios de progesterona e estradiol, outras amostras (n = 600) desses experimentos serão também analisadas para FSH e LH por RIE. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MOTTA, JESSICA C. L.; MADUREIRA, GUILHERME; SILVA, LUCAS O.; ALVES, RODRIGO L. O. R.; SILVESTRI, MAYARA; DRUM, JESSICA N.; CONSENTINI, CARLOS E. C.; PRATA, ALEXANDRE B.; POHLER, KY G.; WILTBANK, MILO C.; et al. Interactions of circulating estradiol and progesterone on changes in endometrial area and pituitary responsiveness to GnRH. BIOLOGY OF REPRODUCTION, v. 103, n. 3, p. 643-653, SEP 2020. (18/03798-7, 17/16701-9, 18/09266-7)