Desenvolvimento de uma multiplex-nested-RT-PCR para a detecção simultânea de cinco RNA vírus associados a infecções congênitas.

• Processo: 17/26298-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2018
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2020
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
• Pesquisador responsável: Thelma Suely Okay
• Beneficiário: Lidia Yamamoto
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Gestantes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Gestantes | lInfecções congênitas | Multiplex-nested-RT-PCR | Infecções Congênitas

Resumo

O objetivo desta proposta é desenvolver uma multiplex-nested-RT-PCR capaz de detectar de forma simultânea cinco RNA vírus associados a infecções congênitas: vírus da rubéola, enterovírus (poliovírus, echovírus, coxckasie vírus, outros enterovírus não classificados), além de três arbovírus (dengue, chikungunya e zika), por meio de amplificações do tipo multiplex-nested-RT-PCR, confirmadas pela amplificação quantitativa apenas do patógeno evidenciado no teste combinado. Os casos positivos serão sequenciados e comparados a protótipos do GenBank. Em nosso laboratório, uma multiplex-nested-PCR capaz de detectar sete patógenos que contêm DNA no genoma e associados a infecções congênitas (Toxoplasma gondii, CMV, HSV, EBV, VZV, parvovírus B19 e adenovírus) foi desenvolvida e após a análise de 357 amostras clínicas provenientes de casos suspeitos (n=161) e casos sem suspeita de infecção (n=196), totalizando 357 casos, a multiplex-nested-PCR detectou 60 casos positivos em 161 suspeitos (37,3%) contrastando com os 13 casos (8%) diagnosticados pelos exames disponíveis nos dois centros obstétricos participantes, 4,7 vezes menos casos. A presente proposta pretende aproveitar a experiência adquirida pelo grupo para desenvolver uma segunda ferramenta molecular, mais complexa, que deverá, juntamente com a primeira, possibilitar a detecção de 12 patógenos, aumentando significativamente os diagnósticos no pré-natal, propiciando tratamento em alguns casos, e seguimento mais amiúde de todas as gestações nas quais infecções foram diagnosticadas.