Expressão e caracterização da enzima glucocerebrosidase em linhagens de p. pastoris com padrões distintos de glicosilação

• Processo: 18/18425-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2018
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2020
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Acordo de Cooperação: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
• Pesquisador responsável: Paulo Lee Ho
• Beneficiário: Letícia Guerra Morosini
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Pichia pastoris Doença de Gaucher
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: doenca de Gaucher | expressão heteróloga | Gucocerebrosidase | Pichia pastoris | Produção de Proteínas Heterólogas

Resumo

A produção de proteínas recombinantes é uma abordagem cada vez mais utilizada para fins comerciais e farmacêuticos. Dentre os sistemas heterólogos utilizados, a levedura Pichia pastoris é uma das plataformas mais exploradas na biotecnologia pelas características de sua produção em alta densidade e grande produtividade apresentando vantagens para sua escolha nesse processo. No caso da doença de depósito alvo desta pesquisa, denominada doença de Gaucher, a ausência ou deficiência da enzima glucocerebrosidase (GCase) causa o acúmulo de glucocerebrosídio formando as células de Gaucher, responsáveis pelos sintomas da doença. O tratamento é feito através da reposição enzimática dessa enzima, principalmente produzida de maneira heteróloga em células de ovário de hamster chinês (CHO) e distribuída pelo SUS, sendo esse medicamento importado, caracterizando um grande gasto para a saúde pública. Desta maneira, o objetivo deste projeto é a produção da enzima GCase na levedura P. pastoris, com a utilização de vetores de expressão para produção da enzima GCase para a transformação da levedura selvagem comercial, e para a transformação da linhagem P. pastoris GlycoSwitch para posterior expressão, purificação e comparação da proteína GCase expressa nestes dois sistemas de hospedeiro. A P. pastoris selvagem comercial deverá resultar numa GCase hipermanosilada enquanto que o uso da linhagem P. pastoris GlycoSwitch deverá resultar na produção de uma GCase com um padrão de glicosilação semelhante ao do produto comercial Cerezyme (Genzyme, da empresa Sanofi-Pasteur).