Avaliação in vitro da adesão, proliferação e expressão de proteínas por meio de imunofluorescência de células osteoblásticas MC3T3-E1 cultivadas com meio condicionado de macrófagos da linhagem RAW 264.7

• Processo: 18/23586-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2019
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2020
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Karina Fittipaldi Bombonato Prado
• Beneficiário: Marina Correia Cassiani
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia celular Osteogênese Osteoblastos Expressão de proteínas Estímulo condicionado Macrófagos Técnicas in vitro Imunofluorescência
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Macrófagos | meio condicionado | osteoblastos | Histologia e Cultura de células

Resumo

A osteogênese é alcançada não somente por células osteoblásticas do sistema esquelético, mas também como resultado de uma cooperação com múltiplos sistemas, entre eles, o imune. Células como macrófagos liberam várias moléculas sinalizadoras que poderiam afetar positiva ou negativamente a capacidade osteogênica dos osteoblastos. Sendo assim, o objetivo do presente projeto será avaliar a influência do meio condicionado de células da linhagem de macrófagos murinos RAW264.7 polarizadas em M1 por meio de lipopolissacarídeo (LPS), na cultura de células osteoblásticas murinas MC3T3-E1. Após a armazenamento do meio condicionado, as células osteoblásticas serão cultivadas em garrafas em meio de cultura osteogênico até a subconfluência e plaqueadas em uma concentração de 2 x 104 células por poço em placas de cultura (n=5) onde estarão já posicionadas lamínulas de vidro adequadas para a adesão e proliferação das células. Os grupos experimentais serão divididos em células controles (C) e células tratadas com 50% de meio condicionado de macrófagos (MC). Após os tempos experimentais, serão avaliados os seguintes parâmetros: adesão e proliferação celular, além da expressão das proteínas fosfatase alcalina (ALP), sialoproteína óssea (BSP) e osteopontina (OPN) por meio de imunofluorescência. Os dados numéricos obtidos serão analisados por programas estatísticos adequados para p d 0.05.