Knock-in do gene TFAM humano em fibroblastos bovinos pela tecnologia CRISPR/Cas9

• Processo: 19/04442-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 29 de julho de 2019
• Data de Término da vigência: 28 de dezembro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Carlos Eduardo Ambrósio
• Beneficiário: Vanessa Cristina Oliveira Nogueira de Pontes
• Supervisor: Jean-Paul Concordet
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Muséum National d'Histoire Naturelle, França
• Vinculado à bolsa: 17/08896-4 - Potencial de utilização de células pós-editadas no gene TFAM pela tecnologia CRISPR Cas 9 em modelo bovino, BP.PD
• Assunto(s): Edição de genes Bovinos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovine | CRISPR Cas9 | Human | Knock-in | Tfam | Edição de genes

Resumo

O Fator de Transcrição A mitocondrial ou TFAM é um membro da família de proteínas de alta mobilidade (HMGB) que regula a transcrição, empacotamento, estabilidade e replicação do DNA mitocondrial (mtDNA). TFAM liga-se a promotores do mtDNA e desempenha um papel fundamental na resposta inflamatória através do estresse do mtDNA. Recentemente foi demonstrado que o gene TFAM é extremamente necessário para manter a integridade do mtDNA, assim como um importante regulador do número de cópias do mtDNA. Devido ao fato dos mecanismos moleculares ligados a herança mitocondrial ainda não serem completamente elucidados, esta proposta tem como objetivo avaliar a possibilidade de editar o gene TFAM pela tecnologia CRISPR/Cas9 através do knock-in do gene TFAM humano em fibroblastos bovinos, a fim de buscar entender a herança mitocondrial e possíveis formas de controlá-la. Para isso, iremos realizar o desenho do RNA guia para o gene TFAM e iremos otimizar a construção do protocolo de knock-in em fibroblastos bovinos. Após o período do BEPE continuaremos esta proposta no Brasil, a fim de gerar novos projetos de pesquisa, pois este estudo é crucial para entender a segregação, herança e função mitocondrial como um modelo para elucidar o papel do TFAM na manutenção da integridade do mtDNA, assim como poderá no futuro servir como modelo para futuras terapias gênicas relacionadas a doenças mitocondriais.Palavras-chave: TFAM, bovino, humano, CRISPR/Cas9.