Avaliação e padronização de técnicas moleculares de diagnóstico para diferenciar cepas de Mycobacterium bovis isoladas de linfonodos de bovinos de abatedouros na região centro-oeste do estado de São Paulo

• Processo: 19/13553-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2021
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária
• Pesquisador responsável: Antonio Carlos Paes
• Beneficiário: Ana Paula Flaminio
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 18/14335-8 - Avaliação e padronização de técnicas moleculares de diagnóstico para diferenciar cepas de Mycobacterium bovis isoladas de linfonodos de bovinos de abatedouros na região centro-oeste do estado de São Paulo, AP.R
• Assunto(s): Zoonoses Tuberculose bovina Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium bovis Técnicas e procedimentos diagnósticos Reação em cadeia da polimerase em tempo real Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Mycobacterium tuberculosis | mycobacterium bovis | pcr em tempo real | PCR quantitativo | Tuberculose Bovina | Zoonoses | Enfermidades Infecciosas dos Animais/Saúde Pública

Resumo

A tuberculose bovina (TBb), causada pelo Mycobacterium bovis, é uma doença infectocontagiosa de caráter crônico que apresenta ampla distribuição mundial, afeta seres humanos, animais domésticos e silvestres, predispondo a grandes perdas econômicas, restrições comerciais e agravos na saúde pública. As espécies do Complexo Mycobacterium tuberculosis apresentam 99,9% de identidade genética, semelhança genotípica que pode ser identificada pela hibridização do DNA, pela identidade de enzimas, por elementos comuns existentes no DNA, como a sequência 16SrRNA, o elemento de inserção IS6110 e uma sucessão de bases repetitivas (Direct Repeated). Algumas técnicas de diagnóstico têm sido desenvolvidas no sentido de ultrapassar limitações, mas ainda não foi proposto um protocolo de diagnóstico para TBb que tenha uma eficácia absoluta, os utilizados atualmente na rotina e considerados "padrão ouro" são lentos, dispendiosos e imprecisos. A Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa (qPCR) tem potencial para mudar o paradigma atual da identificação de micobactérias, diminuindo o tempo de resposta para identificação de semanas a horas, melhorando o diagnóstico, sensibilidade e especificidade. Atualmente, não há um protocolo de qPCR para diagnosticar TBb em carcaças de bovinos, suspeitos subjetivamente desta doença em abatedouros, aceito e aprovado pelos órgãos oficiais e competentes. O estudo aqui apresentado centra-se na avaliação de técnicas de diagnóstico para diferenciar cepas de Mycobacterium bovis por meio de qPCR de amostras de linfonodos de carcaças de bovinos suspeitos de TBb de frigoríficos na região centro-oeste do estado de São Paulo; o desenvolvimento de um protocolo de coleta e conservação de amostra, a padronização da qPCR para diagnosticar a TBb em bovinos, bem como o custo e benefício de tal protocolo mais adaptado à realidade brasileira. Assim, o objetivo principal será estabelecer um método diagnóstico mais específico, sensível e eficaz para diagnosticar a tuberculose em bovinos.