Papel das histonas desacetilases na regeneração e na polarização de macrófagos pós-indução de lesão renal aguda em Zebrafish (Danio rerio)

• Processo: 20/10263-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2021
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
• Pesquisador responsável: Niels Olsen Saraiva Câmara
• Beneficiário: Lais Cavalieri Paredes
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 17/05264-7 - Metabolismo celular, microbiota e sistema imune: novos paradigmas na fisiopatologia das doenças renais, AP.TEM
• Bolsa(s) vinculada(s): 23/04482-1 - Papel da B2m na comunicação entre macrófagos e HSPCs e seu impacto na clonalidade hematopoiética, BE.EP.DR
• Assunto(s): Imunometabolismo Macrófagos Peixe-zebra Histona desacetilases Lesão renal aguda Regeneração Microscopia de fluorescência Citometria de fluxo
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Histonas Desacetilases | Imunometabolismo | Macrófagos | regeneração renal | Zebrafish | Imunologia aplicada

Resumo

A Lesão Renal Aguda (LRA) é definida como a diminuição abrupta de função renal, comprometendo a estrutura e função dos rins, e que, em países desenvolvidos, acomete cerca de 15% dos pacientes hospitalizados. Após a lesão, macrófagos e neutrófilos são recrutados e participam em diversos processos, incluindo a promoção e posterior resolução da inflamação. O controle epigenético de alguns fatores de transcrição, caracterizado por alterações no arranjo da cromatina através da acetilação, dentre outros processos, tem demonstrado ser o principal mecanismo regulatório para a transcrição de genes relacionados à regeneração tecidual. Dessa forma, a nossa hipótese é de que as histonas desacetilases atuam na transição de fenótipos de macrófagos pró-inflamatórios para macrófagos pró-resolutivos, desempenhando um importante papel na modulação de processos que promovem a regeneração renal em Zebrafish. Com esse intuito, o presente estudo visa investigar o papel dessas enzimas no processo regenerativo renal em Zebrafish e identificar alterações metabólicas em macrófagos infiltrantes, em diferentes tempos após lesão. A LRA será induzida com a utilização de cisplatina, um fármaco altamente nefrotóxico. As larvas de Zebrafish serão tratadas profilaticamente ou terapeuticamente com ácido valpróico, e em seguida, encaminhadas para análises de sobrevivência, de expressão de genes relacionados à desdiferenciação celular e dano renal, além de serem avaliados parâmetros como morte e proliferação celular, e a polarização de macrófagos por microscopia de fluorescência e citometria de fluxo. Além disso, iremos desenvolver animais knockout (KO) para arg1, gene regulado positivamente em macrófagos M2. Os animais KO serão usados para a investigação o papel das modificações na cromatina na polarização dos macrófagos. Para isso, após a construção dos peixes geneticamente modificados, nós iremos isolar macrófagos, em diferentes fases da lesão, e estudar o remodelamento da cromatina. Por fim, para buscar os mecanismos, esperamos estudar especificamente a acetilação de histonas em genes envolvidos na polarização de macrófagos in vitro, sob a ação do ácido valpróico ou tricostatina A, através da transferência adotiva dessas células para animais depletados de macrófagos. Esperamos, com o presente projeto, desvendar o papel das enzimas histonas desacetilases na regeneração renal e suas relações com a atuação das células do sistema imune inato. (AU)