Estudo histofisiológico de epidídimos de camundongos transgênicos K18-hACE2 infectados com SARS-CoV-2

• Processo: 21/05802-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2021
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2022
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Histologia
• Pesquisador responsável: Estela Sasso Cerri
• Beneficiário: André Acácio Souza da Silva
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FOAr). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Camundongos transgênicos Epididimo Enzima de conversão de angiotensina 2 Infecções por Coronavirus SARS-CoV-2 COVID-19 Imuno-histoquímica Microscopia eletrônica Morfometria
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: epidídimo | imuno-histoquímica | Microscopia Eletrônica | Morfometria | SARS-CoV-2 | Biologia da Reprodução

Resumo

O SARS-CoV-2 é o vírus causador da COVID-19, doença respiratória grave declarada em 2020 como uma pandemia pela organização mundial da saúde. A fim de se determinar os vários impactos da COVID-19 no organismo, foi desenvolvido um camundongo transgênico (K18-hACE2) que expressa a ACE2 humana, proteína essencial para a entrada do vírus na célula hospedeira e o estabelecimento da infecção. As células do epitélio epididimário produzem um fluido luminal especializado que auxilia na manutenção, dos espermatozoides, além de conferir proteção contra patógenos. A manutenção do pH do fluido luminal é, em parte, controlada pela célula clara que, por meio de algumas sinalizações da célula basal e participação da angiotensina 2, recruta V-ATPase (bomba de prótons) para a membrana apical. O epidídimo também é um órgão rico em células que desencadeiam respostas imunológicas, produzindo citocinas como o TNF-±, IL-1 e IL-6. Portanto, considerando a intensa expressão de citocinas desencadeada pela Covid-19 e que pacientes do sexo masculino com essa doença tem demonstrado alterações hormonais e testiculares, será proposto localizar o vírus nos tecidos epididimários de camundongos K18-hACE2 infectados pelo SARS-CoV-2, bem como avaliar a integridade dos tecidos, a quantidade de macrófagos e a imunoexpressão de TNF-±, IL-6 e V-ATPase nos epidídimos desses animais. Serão utilizados 12 camundongos K18-hACE2 divididos em dois grupos (n=6): grupo controle (GC) e grupo com infecção por 5 dias (G5D), cujos animais receberão DMEM ou serão infectados pelo SARS-CoV-2 por via intranasal, respectivamente. Os epidídimos serão fixados e processados para inclusão em parafina ou resina Araldite (para microscopia eletrônica de transmissão-MET). Nos cortes de parafina, serão realizadas reações de imuno-histoquímica ou imunofluorescênca para análise quantitativa da imunoexpressão de TNF-±, IL-6, V-ATPase e número de macrófagos CD163. Os resultados serão submetidos à análise estatística pelo Student`s-t test (pd0.05). Nos cortes ultrafinos, será analisada a integridade estrutural das células epiteliais, musculares e conjuntivas, bem como a presença do vírus nestes tecidos por meio da MET. (AU)