Nefropatia cristalina em camundongos: papel da proteína Tamm-Horsfall na Lesão Renal Aguda e sua progressão para Doença Renal Crônica

• Processo: 21/09277-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2021
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia de Órgãos e Sistemas
• Pesquisador responsável: Maria Oliveira de Souza
• Beneficiário: Larissa de Araújo
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 22/08271-2 - O papel da proteína Tamm-Horsfall na lesão renal aguda e na transição para doença renal crônica, BE.EP.DD
• Assunto(s): Fisiologia renal Alça do néfron Insuficiência renal crônica Lesão renal aguda Uromodulina Fibrose Inflamação Receptor cross-talk Nefropatias em animal
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: doença renal crônica | Fibrose | Inflamação | lesão renal aguda | Nefropatia Cristalina | Proteína Tamm-Horsfall | Fisiologia Renal

Resumo

A nefropatia cristalina (formação de cristais nos rins) está associada à Lesão Renal Aguda e recidiva, mas não há dados relativos à progressão da Lesão Renal Aguda para a fase crônica. Além disso, não se conhece o tratamento adequado para essa patologia. Estudos recentes de nosso grupo evidenciaram uma queda significativa na expressão da proteína Tamm Horsfall (THP) no segmento espesso ascendente da alça de Henle, associada à Lesão Renal na fase aguda da nefropatia cristalina experimental. Assim, a nossa hipótese é que em condição fisiológica a THP pode modular o sistema imune inato e desempenhar papel renoprotetor. No entanto, na lesão renal aguda induzida por nefropatia cristalina, a redução da síntese de THP pode induzir maior atividade das células residentes do sistema imunológico, resultando em inflamação severa. Nessa condição, os fatores inflamatórios podem se tornar moléculas relevantes na progressão da Lesão Renal da fase aguda para a crônica, bem como na fase recidiva. O objetivo do presente estudo é pontuar a função da THP na Lesão Renal Aguda, na progressão desta para doença renal crônica e na recidiva, associadas à nefropatia cristalina. Para tal, serão investigados: 1) a função e morfologia renal, bem como as vias de sinalização associadas à injúria tecidual nas fases aguda, progressiva e após a recidiva; 2) a ação da THP em um possível cross talk entre o segmento ascendente espesso da alça de Henle e outros compartimentos renais (túbulo proximal e glomérulo), observando especialmente o comportamento dos fatores pró-inflamatórios; 3) papel da enzima hepsina nos efeitos promovidos pela THP. Para responder os objetivos específicos, serão realizados experimentos in vivo e in vitro. Camundongos da linhagem C57BL/6J com idade de 08 semanas [controle, tratados com oxalato de sódio (11 mg/100g, única injeção i.p. para induzir nefropatia cristalina) ou tratados com THP sintética (5 µg/animal, única injeção i.p.)]. Co-culturas celulares do segmento espesso ascendente da alça de Henle, células dendríticas, macrófagos, células do túbulo proximal e do glomérulo serão tratadas com suspensão de oxalato de cálcio (200µg/mL) e/ou THP (10 µM) ou leupeptina (10 µM, inibidor da hepsina) por 24 e 48 horas. Assim será possível inferir como a THP modula as células imunes e interfere no cross talk entre os diferentes componentes do néfron, contribuindo para a descoberta de alvos terapêuticos que podem ser utilizados para atenuar a lesão renal resultante da nefropatia cristalina. As técnicas utilizadas incluem: clearance e função renal, imunofluorescência, western blotting, PCR quantitativo, análise de imagens por microscopia e citometria de fluxo. Desafios da proposta: padronizar o protocolo experimental, uma vez que não há muitos estudos acerca da progressão da lesão renal na nefropatia cristalina e da utilização de THP exógena como molécula renoprotetora após a lesão. Além disso, desafios metodológicos deverão ser enfrentados para investigar a função da THP no cross talk entre os diferentes segmentos do néfron e para análise genômica dos fatores inflamatórios envolvidos neste modelo (proposta de BEPE). (AU)