Regulação temporal da resposta inflamatória em modelos in vitro de infecção polibacteriana das células epiteliais amnióticas imortalizadas com diferentes espécies bacterianas associadas ao parto pré-termo, na presença de Lactobacillus spp.

• Processo: 21/13773-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2022
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
• Pesquisador responsável: Márcia Guimarães da Silva
• Beneficiário: Vitória Carvalho Troitiño
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Resposta inflamatória Células epiteliais Marcadores inflamatórios Escherichia coli Técnicas in vitro Imunoensaio Fatores de necrose tumoral
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Células Amnióticas | citocinas | interação bacteriana | parto pre-termo | Imunopatologia da Relação Materno - Fetal

Resumo

Embora a etiologia do parto pré-termo seja multifatorial, vários microrganismos têm sido associados à sua patogênese, uma vez que as espécies bacterianas mais frequentemente isoladas no líquido amniótico de pacientes com infecção intra-amniótica são pertencentes ao core patológico da vacinose bacteriana. Apesar da infecção da cavidade amniótica ser a principal causa do parto pré-termo espontâneo, existe uma complexidade nesse cenário infeccioso por possuir diversas comunidades bacterianas envolvidas, diferentes interações entre espécies, respostas diferentes aos antibióticos e resultados clínicos distintos. Objetivo: avaliar a regulação temporal da resposta inflamatória em modelos in vitro de interação polibacteriana em células amnióticas epiteliais com diferentes associações de espécies bacterianas relacionadas ao parto pré-termo, na presença de Lactobacillus spp. Metodologia: células amnióticas epiteliais imortalizadas serão desafiadas com diferentes espécies e cargas bacterianas, cenário comumente encontrado no trato genital inferior de gestantes que apresentam partos pré-termo. Culturas celulares sem estímulo serão usadas como controle negativo e, como controle positivo, será utilizado lipopolissacarídeo de Escherichia coli. Para avaliar a regulação da expressão e produção de diferentes marcadores inflamatórios, serão utilizados os sobrenadantes da cultura coletados em diferentes momentos (0h, 6h, 12h, 18h e 24h após o estímulo). Os sobrenadantes obtidos serão submetidos à quantificação proteica pelo Imunoensaio Enzimático (ELISA) para Interleucina(IL)-1²,IL-6,IL-8, IL-10, IL-13, Fator Estimulador de Colônias de Granulócitos e Macrófagos (GM-CSF), Fator de Necrose Tumoral (TNF) -±, ²-Defensina Humana (HBD)1,HBD2, HBD3 e Pentraxina 3 (PTX3). A caracterização ultraestrutural das células amnióticas epiteliais imortalizadas, após estímulo com diferentes combinações de espécies bacterianas, será realizada por microscopia confocal.(AU)