TurboID na identificação de interatores de CRKs em Trypanosoma cruzi

• Processo: 22/00279-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2022
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Simone Guedes Calderano
• Beneficiário: Artur da Paixão Corrêa
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/01013-5 - CRKs (Cdc2 Related Kinases) em Trypanosoma cruzi: desvendando seu papel na proliferação, metaciclogênese e no crosstalk entre proliferação e metabolismo celular, AP.R
• Assunto(s): Ciclo celular Trypanosoma cruzi
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cdc2 related kinase | ciclo celular | Trypanosoma cruzi | Biologia celular, molecular e bioquímica

Resumo

TurboID é uma enzima com capacidade de biotinilar proteínas por proximidade. Sua ação é promíscua e assim proteínas conjugadas à Turbo ID podem biotinilar as proteínas próximas, permitindo a identificação de diversos interatores, inclusive os de interação transitória. Em tripanosomatídeos as CRKs, homólogas das CDKs de eucariotos modelos, são capazes de interagir com ciclinas que resulta na ativação da atividade quinase das CRKs. Sabe-se que CRK1 e CRK3 estão envolvidas no controle do ciclo celular de T. cruzi, contudo quais são seus alvos fosforilados e mesmo quais são as moléculas que regulam as CRKs ao longo do ciclo celular permanecem desconhecidas. Assim, neste projeto será estabelecida a técnica de TurboID a fim de desvendar os interatores de algumas CRKs ao longo do ciclo celular. Utilizando a técnica de genética reversa CRISPR/Cas9, a sequência de DNA de TurboID será adicionada à porção 5' dos dez genes de CRKs (Cdc2 related kinase). Estas enzimas serão utilizadas para padronizar a técnica de biotinilação por TurboID e duas linhagens serão selecionadas para identificar os interatores em cada fase do ciclo celular de epimastigotas sincronizados com hidroxiureia