Expressão heteróloga de PilP para estudo da interação com a secretina do pilus tipo IV

• Processo: 22/12975-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2023
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Cristiane Rodrigues Guzzo Carvalho
• Beneficiário: Guilherme Camargo Pompeu e Silva
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Secretina Xanthomonas Biologia estrutural
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Crio-EM | PilP | Pilus tipo IV | Secretina | Xanthomonas | Biologia Estrutural

Resumo

Pili tipo IV (T4P) são filamentos extracelulares retráteis de bactérias que permitem a motilidade tipo twitching sobre superfícies. No fitopatógeno Xanthomonas citri pv. citri, T4P foram associados também com processos de formação de biofilme e adesão. Neste organismo, o complexo secretina que forma o canal de membrana externa de passagem desses filamentos está sendo estudado por criomicroscopia eletrônica (cryoEM) de partículas purificadas diretamente de suas células. Determinou-se assim a estrutura da secretina formada por 14 cópias de PilQ circundada por 7 cópias da proteína de ligação ao peptidoglicano TsaP (dados não publicados). Para investigar como este canal se acopla à base da maquinaria de montagem de T4P na membrana interna, decidimos investigar a sua interação com PilP, a lipoproteína responsável por ancorar um complexo ao outro no periplasma. Pretendemos clonar o domínio HR C-terminal da proteína em um vetor para expressão heteróloga e purificação por cromatografia de afinidade. A proteína purificada poderá então ser adicionada aos preparos de secretina para tentarmos observar a interação in vitro por negative stain em um microscópio eletrônico de transmissão e por técnicas complementares. Espera-se revelar a posição e orientação relativa de PilP em contato com o domínio N0 de PilQ no complexo, o que poderá ser investigado em maior resolução por cryoEM.