Efeitos da melatonina sobre o perfil proteômico global de células de carcinoma mamário (linhagens MCF-7 e MDA-MB-468)

• Processo: 22/09434-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biologia Geral
• Pesquisador responsável: Luiz Gustavo de Almeida Chuffa
• Beneficiário: Roberta Carvalho Cesário
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Neoplasias mamárias Melatonina Mitocôndrias Proteoma Transformação celular neoplásica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Câncer de mama | Mcf-7 | Mda-Mb-468 | melatonina | mitocôndria | Proteoma | Carcinogenese experimental

Resumo

O câncer de mama (CM) é o tumor mais incidente e mortal entre as mulheres em todo o mundo. No Brasil, a estimativa é de 66.280 novos casos até o final de 2021. O câncer de mama é estratificado em subtipos moleculares dependendo da expressão de marcadores que podem apresentar melhor ou pior prognóstico. Linhagens celulares que expressam o receptor de estrogênio (ER+) e progesterona (PR+) contemplam 70% dos casos de câncer de mama, no entanto, apresentam melhor prognóstico, pois respondem a terapias hormonais. Já linhagens triplo-negativas que não expressam receptores ER, PR e HER-2, são menos incidentes, representando de 10 a 20% dos casos, porém o tratamento é o mais desafiador e tem pior prognóstico. A melatonina (Mel) é um neurohormônio secretado pela glândula pineal na fase de escuro e tem mostrado propriedades antitumorais em ensaios in vitro e in vivo. Portanto, o objetivo do presente estudo será avaliar o papel da melatonina sobre o perfil proteômico global usando extrato celular total e mitocondrial de células de carcinoma mamário com bom (células MCF-7) e mau prognóstico (células MDA-MB-468). No experimento, as linhagens serão divididas em: 1) Grupo Controle MCF-7; 2) Grupo Controle MDA-MB-468; 3) Grupo de células MCF-7 tratadas com melatonina; 4) Grupo de células MDA-MB-468 tratadas com melatonina; 5) Grupo Controle MCF-7 com extração do proteoma mitocondrial; 6) Grupo Controle MDA-MB-468 com extração do proteoma mitocondrial ; 7) Grupo de células MCF-7 tratadas com melatonina com extração do proteoma mitocondrial; 8) Grupo de células MDA-MB-468 tratadas com melatonina com extração do proteoma mitocondrial. A concentração e o o tempo de exposição à melatonina serão estabelecidos através do ensaio de viabilidade celular. Será avaliada a capacidade migratória das linhagens frente ao tratamento. Após o tempo de tratamento com melatonina, será realizada a extração e quantificação de proteínas totais e mitocondriais. O fracionamento das mitocôndrias será feito através do kit Mitochondrial Isolation Kit for Cell Culture (ThermoScientific) de acordo com as recomendações do fabricante. O perfil proteômico das linhagens será identificado por espectrometria de massas utilizando equipamento de nanocromatografia líquida Ultimate 3000 LC acoplado a um equipamento de espectrometria de massas Q-Exactive. Os dados brutos no formato.RAW serão submetidos ao software PatternLab (versão 4.0.0.84) para a obtenção da identificação das proteínas. O ensaio de Western blot será empregado para a quantificação de proteínas relacionadas a síntese de melatonina e metabolismo mitocondrial. Os dados serão estudados estatisticamente com base no fold-change e 1.5 ou d-1.5 e FDR d 1% e apresentados utilizando ferramentas de bioinformática. Espera-se compreender os efeitos da melatonina sobre o proteoma de células de carcinoma mamário com bom e mau prognóstico na tentativa de elucidar possíveis mecanismos pela qual a melatonina afeta a sobrevivência e o metabolismo energético relacionado a mitocôndria da célula tumoral, fornecendo base para possíveis terapias personalizadas para o câncer de mama.