Efeito pró-osteogênico das fitocistatinas CsinCPI-2 e CaneCPI-5 no reparo ósseo - Estudo in vitro e in vivo

• Processo: 21/14400-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2025
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Periodontia
• Pesquisador responsável: Joni Augusto Cirelli
• Beneficiário: Maria Eduarda Scordamaia Lopes
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FOAr). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Cistatinas Macrófagos Regeneração óssea
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cistatinas | Macrófagos | regeneração óssea | Periodontia

Resumo

O objetivo do presente estudo será avaliar o efeito pró-osteogênico das fitocistatinas CsinCPI-2 e CaneCPI-5, por meio de estudos in vitro e in vivo. Especificamente, o estudo in vitro avaliará o efeito modulador das fitocistatinas na resposta de macrófagos derivados da medula óssea de camundongos (BMDMs) e na diferenciação osteoblástica de células primárias mesenquimais indiferenciadas de medula óssea de camundongos (BMSCs). A modulação dos macrófagos será avaliada por análises da expressão gênica (RT-qPCR) e produção / secreção proteica (Western blot / ensaio CBA) de citocinas (pró- ou anti-inflamatórias) e outras moléculas alvos que caracterizem um perfil fenotípico dentro do espectro compreendido entre as polarizações para M1 ou M2. Para avaliação da diferenciação osteoblástica, serão avaliadas a expressão gênica e produção proteica de marcadores ósseos, além da atividade de fosfatase alcalina e formação de nódulos de mineralização pelo método vermelho de alizarina. Ainda no estudo in vitro, BMDM e BMSC serão cultivadas em co-cultura sob scaffolds de poli-µ-caprolactona (PCL) com incorporação das fitocistatinas. Neste experimento será avaliado a diferenciação osteoblástica sob estímulo direto ou indireto das fitocistatinas. O estudo in vivo será conduzido após a obtenção dos resultados in vitro e deverá avaliar a reparação óssea de defeitos críticos induzidos na calvária de camundongos tratados com scaffolds 3D de PCL com incorporação da fitocistatina que melhor apresentar resposta in vitro favorável à reparação óssea. Serão utilizados 32 camundongos BALB/C, divididos aleatoriamente em 4 grupos experimentais: Grupo controle 1 (defeito de calvária sem tratamento), Grupo controle 2 (defeito de calvária + scaffold + gel veículo), Grupo controle positivo (defeito de calvária + scaffold + BMP2) e Grupo tratamento (defeito de calvária + scaffold + fitocistatina selecionada). Análises microtomográfica e histológica serão realizadas para avaliação da formação óssea nas áreas dos defeitos. Além disso, análise imuno-histoquímica será realizada para identificar e localizar proteínas relacionadas com diferenciação osteoblástica e formação óssea. Serão utilizados testes estatísticos apropriados para comparações entre os grupos e adotado nível de significância de 5% para a tomada da decisão quanto à validade da hipótese testada.