Contribuir para o desenvolvimento do modelo de edição gênica pelo Sistema CRISPR/Cas9 de mutações do gene RET em linhagens celulares de Carcinoma Medular de Tiroide (MTC)

• Processo: 23/03891-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2025
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Rui Monteiro de Barros Maciel
• Beneficiário: Nathália Bachega Villar Fiel
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/02752-6 - Neoplasia Endócrina múltipla tipo 2 e Carcinoma Medular da Tiroide: novas questões da biologia do desenvolvimento, genética, imunologia, epidemiologia, mecanismo de doença e manejo clínico, AP.TEM
• Assunto(s): Carcinoma medular de tiroide Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Edição de RNA Endocrinologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: carcinoma medular de tiróide | Crispr | edição gênica | Neoplasia Endócrina Múltipla do tipo 2 | Endocrinologia

Resumo

A Neoplasia Endócrina Múltipla Tipo 2 (MEN2) é uma doença genética autossômica dominante, caracterizada pela associação de tumores de origem endócrina. Pode ser classificada como MEN2A e MEN2B, de acordo com os órgãos afetados. A manifestação clínica mais importante de todos os subtipos de MEN2 é o carcinoma medular de tireoide (MTC), ocorrendo em mais de 95% dos pacientes. Mutações no gene RET (Rearranged during transfection) são responsáveis pelo fenótipo MEN2. O curso clínico do MTC em pacientes com MEN2A é variável, e a progressão da doença está associada a mutações códon-específicas no gene RET. O códon 634 (éxon 11) é o mais afetado, representando até 85% dos casos de MEN2A. MEN2B é mais comumente causado pela mutação p.M918T (éxon 16). A diretriz da American Thyroid Association (ATA) classifica os pacientes com a mutação p.M918T como de maior risco para o desenvolvimento de MTC e recomenda a tireoidectomia total antes do primeiro ano de vida; pacientes com mutação no códon 634 são classificados como alto risco, e a tireoidectomia deve ser indicada antes dos 5 anos de idade. A cirurgia é o único tratamento curativo para o MTC. Pacientes com tumor restrito à tireoide apresentam bom prognóstico, com sobrevida global de 95,6%, em 10 anos, enquanto pacientes que apresentam metástase regional ou à distância no diagnóstico apresentam sobrevida global de 75,5 e 40%, respectivamente. Esses dados ilustram a necessidade de avançar no conhecimento dos mecanismos moleculares envolvidos na patogênese do MTC, cujo conhecimento cumulativo permite novas perspectivas para a terapia da doença metastática. Recentemente, os avanços da biologia molecular proporcionaram grandes saltos nas tecnologias de engenharia genética. O CRISPR é uma ferramenta poderosa para editar genomas e nos permite alterar facilmente as sequências de DNA e modificar a função do gene. Além disso, avanços recentes nessa tecnologia possibilitam a correção de mutações pontuais. Com base nisso, pretendemos corrigir mutações do gene RET por edição gênica das linhagens celulares TT (p.C634W) e MZC (p.M918T), usando o sistema CRISPR/Cas9 e avaliar o fenótipo das células parentais (mutadas) e editadas (não mutadas), gerando um modelo de estudo para a doença; esperamos corrigir as mutações do gene RET de linhagens celulares derivadas do MTC e avaliar o fenótipo das células parentais (mutadas) e editadas (não mutadas), gerando assim um modelo para o estudo de MEN2 pelo sistema CRISPR/Cas9. Para monitorar o desenvolvimento do tumor in vivo, realizaremos o xenotransplante das linhagens de células MZ-CRC-1 e TT em embriões de zebrafish, além de células editadas por CRISPR-Cas9.