Produção e purificação de fragmentos de anticorpos contra oligômeros do peptídeo beta-amiloide em E.coli

• Processo: 23/02224-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Adriano Silva Sebollela
• Beneficiário: Carolina Carla Valera Sanchez
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/10925-8 - Oligômeros neurotóxicos do peptídeo beta-amiloide: isolamento bioquímico, estudos conformacionais e neutralização em modelos da Doença de Alzheimer, AP.R
• Assunto(s): Anticorpos Oligômeros Purificação Proteínas recombinantes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: anticorpo | oligômeros | procarioto | purificação | proteínas recombinantes

Resumo

O bolsista será responsável pela produção e purificação dos fragmentos de anticorpos tipo scFv usados na rotina do nosso Lab. Nosso scFvs são seletivos para oligômeros tóxicos do peptídeo beta-amiloide (AbOs), associados a doença de Alzheimer. Uma vez purificados, os anticorpos são usados em analises in vitro em experimentos livres de células, como no isolamento e estudo estrutural das espécies oligoméricas neurotóxicas de Abeta, ou em estudos de neuroproteção em linhagens celulares; ou mesmo in vivo, em ensaios comportamentais em modelos murinos de Alzheimer (em colaboração com outros grupos). Já temos disponível no Lab as cepas de E.coli engenheiradas para produção de diversos scFvs, como NUsc1 e NUsc7. O trabalho do bolsista será manter essas cepas, expandi-las quando necessário, e induzir a produção dos diversos NUsc's em escala pequena-intermediaria (1-5L de meio de cultura). Após a expressão, o bolsista deverá ainda realizar a purificação por cromatografia de afinidade em coluna de proteína A imobilizada, seguindo protocolo já bem estabelecido em nosso Laboratório. E por fim, realizara a a analise da qualidade após cada rodada de produção/purificação.