Efeito de agonista e de moduladores alostéricos dos receptores nicotínicos em modelo in vitro de células pulmonares estimuladas com lps: avaliação de marcadores inflamatórios e da expressão de eca2

• Processo: 22/03653-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia de Órgãos e Sistemas
• Pesquisador responsável: Carla Máximo Prado
• Beneficiário: Juliana Tavares Correa
• Instituição Sede: Instituto de Saúde e Sociedade (ISS). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus Baixada Santista. Santos , SP, Brasil
• Assunto(s): Inflamação Lesão pulmonar aguda Pulmão Receptores nicotínicos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cultura de celula pulmonar | Inflamação | Lesão Pulmonar Aguda | modelo celular | pulmão | Receptores nicotínicos | Fisiopatologia do Sistema Respiratório

Resumo

A lesão pulmonar aguda (LPA) é caracterizada por uma insuficiência respiratória aguda, de início súbito, recrutamento de polimorfonucleares e liberação de mediadores pró-inflamatórios, e pode induzir a aumento de citocinas, sendo uma das consequências da COVID-19 grave. Não há tratamento efetivo e a mortalidade é alta. O estímulo da via colinérgica e dos receptores nicotínicos modulam a resposta inflamatória pulmonar aguda em diversos modelos experimentais, e mais recentemente estudos que associem os receptores nicotínicos a COVID-19 e enzima conversora de angiotensina 2 (ECA2) tem sido reportado. Entretanto, estudos in vitro que elucidem melhor os mecanismos de ação e comparem as diferentes formas de estímulos destes receptores se faz necessário. O objetivo do presente projeto é avaliar o efeito de moduladores e alostéricos positivos dos receptores nicotínicos (±7-nAChR e ²2-nAChR) em modelo in vitro de cultura de célula. Para tanto, as células epiteliais pulmonares humanas BEAS-2B, A549 e também uma linhagem de macrófagos de camundongo (RAW 264.7) serão cultivadas e estimuladas com LPS, e então tratadas com agonista de receptor nicotínico ou moduladores alostéricos. Será realizada curva dose resposta para determinação da melhor concentração e tempo a ser estudado. Então, neste tempos o sobrenadante será coletado para análise de citocinas, e o material celular para análise de expressão genica de acetilcolinesterase (AChE), transportador vesicular de acetilcolina (VAChT), receptores nicotínicos de acetilcolina (±7-nAChR e ²2-nAChR) e da expressão da enzima conversora de angiotensina 2 (ECA2), citocinas (TNF-± e IL-6), assim como da via JAK-2/STAT-3/SOCS3 e NrF-2, o principal regulador da resposta antioxidativa. Também será realizada análise do estresse oxidativo. A análise estatística será realizada por meio do programa GraphPad Prism. Baseado em estudo preliminares de nosso grupo sugerindo que o estímulo dos receptores nicotínicos module a resposta inflamatória aguda em modelos in vivo, e também que a relação destes com a expressão de ECA2, espera-se que o uso destes agonistas e moduladores reduza a resposta inflamatória nestes três modelos celulares e que seja elucidados possíveis mecanismos envolvidos, além e possíveis diferenças entre moduladores e agonistas.