Recelularização de scaffold com células endoteliais e células musculares lisas

• Processo: 23/05874-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Vigência (Início): 01 de agosto de 2023
• Vigência (Término): 31 de outubro de 2024
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Cirurgia
• Pesquisador responsável: Matheus Bertanha
• Beneficiário: Lenize da Silva Rodrigues
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/14145-7 - Estudo experimental do comportamento hemodinâmico de vasos sanguíneos produzidos por engenharia de tecidos com células-tronco em aorta de coelhos, AP.R
• Assunto(s): Células endoteliais Células-tronco Doença arterial periférica Tecidos suporte Terapia baseada em transplante de células e tecidos Vasos sanguíneos Procedimentos cirúrgicos vasculares
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: células endoteliais | célula-tronco | Doença arterial periférica | Tecidos Suporte | terapia celular | vasos sanguíneos | Cirurgia Vascular

Resumo

As doenças cardiovasculares são as principais responsáveis pela mortalidade na população ocidental, dos quais 5% apresentam doença arterial periférica (DAP). Com o agravamento da DAP em pacientes sintomáticos sem condições clínicas ou técnicas para a revascularização do membro acometido, cerca de 25% acabam evoluindo para amputação do membro inferior. Pesquisas recentes têm demostrado um futuro promissor na terapia regenerativa e substitutiva de tecidos envolvendo células-tronco e engenharia celular, com possibilidade de aplicação clínica em diversas doenças, incluindo as doenças de origem cardiovascular. Objetivo: Promover o desenvolvimento das técnicas de engenharia de tecidos em vasos sanguíneos (Tissue- engineering Blood Vessels - TEBV) a partir de um modelo animal em coelhos, utilizando-se de arcabouços produzidos por descelularização de veias cavas inferiores, promovendo seu repovoamento celular com células-tronco mesenquimais de tecido adiposo autólogas (adipose tissue derived stem cells- ASC), além de induzir a diferenciação celular em endotélio e músculo liso in vitro para posteriormente implantar um seguimento do neovaso na circulação arterial em aorta abdominal, caracterizando seu compoetamento in vivo. Métodos: Serão utilizados 40 coelhos fêmeas para todos os experimentos. Veias cavas inferiores serão obtidas de 20 destes coelhos para a produção dos arcabouços pelo processo padronizado de descelularização com dodecil sulfato de sódio 1% (SDS), além de fornecer veias in natura para compor o grupo controle que receberá veias alogênicas. Para obtenção das células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo, fragmentos de 2g de gordura interescapular serão coletados por técnica cirúrgica asséptica e expandidas após digestão enzimática (ASC autólogas para o experimento in vivo). Dessa forma, serão constituidos dois grupos para o experimento in vitro e in vivo. Pequenos fragmentos de veia in natura, veia descelularizada e veia recelularizada (n=10, para cada grupo) serão analizados antes da implantação por testes de reatividade vascular. O procedimento cirúrgico será realizado através de uma interposição da veia cava, in natura alogênica na aorta abdominal (n=10) (Grupo 1 veia cava alogênica) em comparação ao grupo que receberá uma interposição do neovaso produzido (TEBV) na aorta abdominal (n=10) (Grupo 2 Neovaso com CTM autóloga). Serão realizadas análises do produto nas duas etapas, através de análise histológica, imunohistoquímica e imunofluorescência.Aperfeiçoamento técnico do bolsista com a linha de pesquisa em engenharia celular de vasos sanguíneos a partir de modelo animal (coelhos), utilizando-se de arcabouços produzidos por descelularização de veias cavas inferiores (de coelho), promovendo seu repovoamento celular com células-tronco mesenquimais autólogas, promover a diferenciação celular in vitro e implantá-las na aorta abdominal a para testar sua funcionalidade in vivo; O bolsista irá participar de todas as etapas desse projeto regular: Obtenção de veias cava inferiores para arcabouço; Obtenção de tecido adiposo; Expansão e caracterização das CTM derivadas de tecido adiposo autóloga; Arcabouços semeados com endotélio luminal (células autólogas); Diferenciação de CTM em células musculares lisas (Autólogas); Semeadura de células musculares lisas produzidas a partir de CTM sobre o neovaso endotelizado, Cirurgia de implantação do neovaso, monitoração dos animais e análises histológicas. Dessa forma, o bolsista irá aperfeiçoar as suas técnicas e padronizar as mesmas em nosso laboratório.