Uso da técnica de cytobrush para determinação do perfil de citocinas no endométrio no início da gestação em bovinos

• Processo: 23/07459-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2023
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Guilherme Pugliesi
• Beneficiário: Lucas Cárnio de Siqueira Branco
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 22/14936-7 - Modulação da resposta imune inata pela sinalização do concepto no início da gestação em bovinos, AP.R
• Assunto(s): Sistema imune Útero Fisiologia da reprodução
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Sistema Imune | Útero | Fisiologia da reprodução

Resumo

Novas tecnologias para detectar com segurança a prenhez antes do 21o dia após a inseminação permitiriam a oportunidade de um novo serviço no próximo estro e poderia melhorar o desempenho reprodutivo e a lucratividade para fazendas comerciais de leite e corte. Assim, a quantificação dos genes estimulados pelo interferon-tau (ISG) em leucócitos do sangue periférico e a ultrassonografia Doppler do corpo lúteo (CL) foram testadas pelo nosso grupo como métodos precoces de diagnóstico gestacional. Embora a avaliação da luteólise por ultrassonografia Doppler seja um excelente preditor de prenhez, não é eficiente no monitoramento da viabilidade do concepto e na predição da mortalidade embrionária entre 20 e 30 dias em bovinos com CL ativo. Além disso, a proporção de resultados falso-negativos ainda não é adequada para o uso da expressão de ISG como um método com acurácia e viabilidade para detecção da prenhez antes do 20o dia. Portanto, a melhor compreensão dos eventos básicos envolvidos na modulação do sistema imunológico no início da gestação é o primeiro passo para a descoberta de novos biomarcadores para detecção da prenhez mais cedo do que as metodologias tradicionais. Portanto, nosso principal objetivo com o presente estudo é determinar se a sondagem do corpo do útero usando a técnica de cytobrush é viável sem perturbar a manutenção da gestação e compreender a resposta materna à sinalização do concepto entre os dias 15 e 20 de gestação, a fim de compreender a modulação do sistema imunológico associada à perda embrionária precoce e identificar, em um estágio inicial, a estado gestacional em fêmeas bovinas. Para isso, 30 novilhas Nelore terão o ciclo estral sincronizado e serão submetidas a um procedimento de transferência de embriões (n=22) ou a um procedimento sham-ET (n=8) no dia 7. Amostras de sangue jugular (10 mL) serão coletadas nos dias 7, 10, 15 e 20 após o estro, conforme indicado para determinação de progesterona (P4) e isolamento de PBMC. Além disso, uma única amostra uterina será coletada por citobrush nos dias 7, 10, 15 e 20. A amostra de citobrush será utilizada para extração de mRNA e miRNA. O mRNA de PBMC e PMN será extraído para determinação da expressão de ISG15 e RSAD2. O mRNA das amostras citológicas será utilizado para análise da expressão gênica por RT-PCR.