Transdiferenciação de Células Epiteliais de Vesícula Biliar em Hepatócitos In Vitro

• Processo: 23/10642-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2024
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2028
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Mayana Zatz
• Beneficiário: Lara Borges Pacheco
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 25/08696-1 - Ativação da rede gênica hepática endógena em iPSCs via CRISPRa para geração de hepatócitos induzidos, BE.EP.DD
• Assunto(s): Hepatócitos Vesícula biliar Biologia celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: CRISPR-on | hepatócitos | transdiferenciação | Vesícula biliar | Biologia celular

Resumo

Doenças hepáticas são responsáveis por dois milhões de mortes no mundo anualmente e apresentam diferentes causas (e.g. álcool, vírus, compostos químicos, e fatores genéticos). Em caso de insuficiência hepática, o transplante é a única terapia, mas a escassez de doadores e a necessidade de imunossupressão dificultam sua implementação. A bioengenharia representa uma alternativa ao transplante tradicional, mas requer fontes celulares proliferativas e funcionais. Hepatócitos primários (PHH), o padrão-ouro para ensaios celulares, perdem rapidamente seu fenótipo in vitro. Células-tronco pluripotentes induzidas humanas (iPSCs) são de fácil manuseio in vitro e podem ser diferenciadas em diversos tecidos, mas sua produção apresenta alto custo, longa duração e baixa eficiência. Além disso, células diferenciadas de iPSCs, como células similares a hepatócitos (HLCs), apresentam fenótipo predominantemente fetal. A transdiferenciação reduz o tempo de fabricação e o risco tumorigênico em comparação a HLCs, representando uma alternativa promissora para a geração de hepatócitos. Os métodos de transdiferenciação prevalentes convertem fibroblastos de camundongos em hepatócitos (iHeps) por meio da expressão ectópica de fatores de transcrição hepáticos, gerando linhagens pouco funcionais com fenótipo intermediário entre fibroblastos e hepatócitos. Assim, o objetivo deste trabalho é transdiferenciar fontes celulares alternativas - como células epiteliais da vesícula biliar - em hepatócitos in vitro utilizando o sistema CRISPRon. A funcionalidade dos iHeps será avaliada por RT-qPCR, imunofluorescência, e ELISA; o potencial terapêutico das iHeps será avaliado pelo transplante em modelos murinos de fibrose hepática.