Compreensão do papel da dermicidina na sobrevivência e migração celular do melanoma usando a seriniquinona como ferramenta farmacológica

• Processo: 23/17281-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Geral
• Pesquisador responsável: Leticia Veras Costa Lotufo
• Beneficiário: Rodrigo dos Anjos Miguel
• Supervisor: Sharon Prince
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Cape Town (UCT), África do Sul
• Vinculado à bolsa: 22/15832-0 - Avaliação da entrega de seriniquinona para células de melanoma por nanopartículas de poli (D,L-ácido láctico-co-ácido glicólico) (PLGA), BP.MS
• Assunto(s): Interação proteína-proteína Melanoma Superexpressão
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Dermicidina | Interação proteína-proteína | melanoma | Seriniquinona | silenciamento | superexpressão | mecanismo de ação

Resumo

A seriniquinona (SQ) e seus derivados são os únicos moduladores conhecidos da dermicidina (DCD) até o momento. Essa proteína parece estar envolvida numa série de processos relacionados com o câncer, incluindo sobrevivência e migração celular, e caquexia. Apesar do seu potencial como candidato a fármaco, com base nos seus promissores dados de eficácia in vitro, pouco se sabe sobre o mecanismo de ação da SQ e o envolvimento da DCD na biologia do câncer. Além disso, a SQ possui baixa solubilidade em água e, nesse sentido, nanopartículas (NPs) de ácido poli (láctico-co-glicólico) (PLGA) (PLGA-NPs) têm se mostrando grandes aliadas ao possibilitar a encapsulação da SQ, a melhoria de sua solubilidade com a subsequente dispersão em veículos aquosos e a sua liberação prolongada, além de exibir interessantes resultados de toxicidade em ensaios in vivo. Contudo, pouco se sabe sobre o efeito da nanoencapsulação no mecanismo de ação deste candidato a fármaco. Considerando essas características, nosso grupo pretende estabelecer modelos de melanoma nos quais a DCD seja silenciada de forma estável ou superexpressa, e verificar se sua modulação manterá os potentes efeitos biológicos da SQ livre ou encapsulada e, ainda, elucidar o papel da DCD no mecanismo de ação da SQ. As células serão silenciadas por transfecção com um plasmídeo que codifica para o short hairpin RNA (shRNA) específico da DCD, que na célula será transcrito, processado e terá como alvo o mRNA da DCD, levando ao knockdown de sua expressão. A superexpressão da DCD será alcançada por transfecção com um plasmídeo contendo a sequência de codificação da DCD marcada com uma sequência FLAG, que será útil como um epítopo para rastrear e marcar a DCD. A geração de linhagens celulares estáveis com a DCD silenciada ou superexpressa será confirmada avaliando a expressão do mRNA da DCD pela transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase quantitativa (RT-qPCR) e avaliando a expressão da proteína DCD por Western blotting.