Análise proteômica direcionada a quinases ativas em melanoma cutâneo

• Processo: 23/08112-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Pesquisa
• Data de Início da vigência: 06 de agosto de 2024
• Data de Término da vigência: 05 de julho de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: André Zelanis Palitot Pereira
• Beneficiário: André Zelanis Palitot Pereira
• Pesquisador Anfitrião: Gunnar Dittmar
• Instituição Sede: Instituto de Ciência e Tecnologia (ICT). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São José dos Campos. São José dos Campos , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Luxembourg Institute Of Health, Luxemburgo
• Assunto(s): Neoplasias Fosforilação Melanoma
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer | fosforilação | melanoma | Proteínas-quinase | Proteômica direcionada à alvos | câncer

Resumo

A fosforilação de proteínas mediada por quinases é uma modificação pós-traducional (PTM) ubíqua, que regula diversas vias de transdução de sinal em metazoários. Os efeitos biológicos da fosforilação de proteínas são diversos, variando desde a localização subcelular e alterações estruturais até o turnover proteico. Com mais de 550 quinases descritas até o momento e abrangendo quase 2% dos genes humanos, o human kinome engloba proteínas quinase que participam de vários circuitos de sinalização celular, tornando as quinases alvos promissores para drogas. Por outro lado, a ativação recíproca de quinases em múltiplas vias de sinalização impõe um importante desafio ao estudo deste importante processo biológico. Uma abordagem alternativa é a análise direcionada apenas da atividade da quinase que, por sua vez, permite uma visão geral da fosfo-regulação em uma célula ou tecido. Nesse contexto, a espectrometria de massas tem sido usada para mapear quinases ativadas, com o uso de monitoramento de fosfopeptídeos sintéticos marcados com isótopos pesados para o loop de ativação de quinases, uma região conservada de ~ 20 a 30 resíduos de aminoácidos dentro do domínio destas enzimas. O impacto da fosforilação de proteínas é de suma importância no desenvolvimento do câncer, como no melanoma, a forma mais letal de câncer de pele. Do ponto de vista molecular, o melanoma é caracterizado pela ativação constitutiva de vias de sinalização relacionadas ao ciclo celular, como as vias de sinalização da proteína quinase ativada por mitógeno (MAPK-) e da fosfoinisitede 3-quinase (PI3K). Quase 50% dos pacientes com melanoma carregam a típica mutação V600E no gene BRAF deixando a via RAF-MEK-ERK constitutivamente ativada. Assim, inibidores seletivos direcionados à forma mutante V600E da quinase B-Raf são usados na prática clínica. Portanto, devido à importância da fosforilação de proteínas nos processos fisiopatológicos, o objetivo principal deste projeto é aplicar a proteômica direcionada à análise do status de ativação da rede de proteínas-quinase em linhagens celulares de melanoma humano submetidas a inibidores das proteínas quinases B-RAF e MEK, bem como no modelo de organoides de melanoma para validar os resultados da cultura celular. Espera-se que os resultados obtidos forneçam importantes informações sobre as vias ativas durante o tratamento quimioterápico do melanoma, bem como implicações para o prognóstico e desenvolvimento deste tipo de tumor.