Caracterização cinética da proteína Ohr de Acinetobacter baumannii, uma proteína antioxidante envolvida na resistência bacteriana a antibióticos

• Processo: 24/03340-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Luis Eduardo Soares Netto
• Beneficiário: Melissa Siolin Martins
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/07937-8 - Redoxoma, AP.CEPID
• Assunto(s): Acinetobacter baumannii Peroxidase
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: acinetobacter baumannii | Lipoamida | Ohr | peroxidase | Peróxido Orgânico | tiol | peroxidase atividade baseada em cisteina

Resumo

Ohrs (Organic Hydroperoxide Resistance Proteins) são peroxidases envolvidas na defesa de bactérias contra peroxinitrito e hidroperóxidos orgânicos, como peróxidos de ácidos graxos. Estão ausentes em vertebrados e plantas vasculares, mas presentes em uma ampla gama de microrganismos (incluindo alguns patógenos), com alta conservação de estrutura. Portanto, uma molécula inibidora pode especificamente atingir Ohrs de patógenos, mas não afetar hospedeiros de interesse na medicina e/ou agricultura. Este projeto tem como foco Ohr de Acinetobacter baumannii, uma bactéria de alto risco para a saúde global que está na lista da Organização Mundial da Saúde (OMS) de organismos super-resistentes a vários antibióticos. Recentemente, o grupo liderado pelo Dr. Wei Huang (Shenzhen People's Hospital, China) identificou uma molécula (6-fluorobenzo[d]isotiazol-3(2H) -ona = 6D1) que inibiu o crescimento do Acinetobacter baumannii. Notavelmente, após sequenciar os genomas de linhagens mutantes que desenvolveram resistência a 6D1, foi observado que essas bactérias apresentaram uma mutação em um resíduo catalítico (Arg15) no gene ohrB derivado do plasmídeo. Assim, este projeto representa uma colaboração entre nosso grupo de pesquisa e o grupo do Dr. Wei Huang, visando obter informações sobre os mecanismos moleculares subjacentes ao envolvimento de OhrB na inibição de Acinetobacter baumannii pelo composto 6D1. Inicialmente, a enzima selvagem e OhrBR15C foram expressos em Escherichia coli, purificados por cromatografia de afinidade de níquel através de marcadores His-tag. Ensaios acoplados ao sistema lipoamida - lipoamida desidrogenase foram realizados e resultados preliminares indicaram que a mutação R15C provocou uma diminuição acentuada na atividade de OhrB. Em seguida, pretende-se realizar ensaios enzimáticos para investigar um possível efeito inibitório de moléculas como 6D1 sobre OhrB.