Caracterização do componente da transcriptase reversa da telomerase (TERT) de Leishmania infantum e avaliação de seu papel na manutenção dos telômeros, integridade do genoma, progressão do ciclo celular e infectividade do parasita

• Processo: 23/16161-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Maria Isabel Nogueira Cano
• Beneficiário: Habtye Bisetegn Endalamaw
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 18/04375-2 - Estudos sobre a biogênese e composição do complexo ribonucleoprotéico da telomerase de Leishmania spp. e sua regulação, AP.TEM
• Assunto(s): Leishmania infantum Proliferação celular Telomerase Telômero
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: integridade do genoma | leishmania infantum | Proliferação celular | telomerase | telômeros | telomeros e telomerase

Resumo

A leishmaniose é uma doença tropical negligenciada transmitida por vetores, causada por protozoários parasitas intracelulares do gênero Leishmania. A doença representa um importante problema de saúde pública mundial, com 1,5 a 2 milhões de casos anuais em todo o mundo. A Leishmania infantum causa a leishmaniose visceral, que é a forma mais fatal da doença e responsável por mais de 90% das mortes por leishmaniose. Como não existe tratamento ou método de controle eficientes para erradicar a doença, se faz urgente a busca por alvos parasito-específicos para o desenho de fármacos. Telômeros são estruturas nucleoproteicas compostas de DNA repetitivo e proteínas associadas, que protegem as extremidades dos cromossomos eucarióticos da resposta a danos no DNA. Eles são vitais para manter a estabilidade do genoma e a proliferação celular. Eles são alongados a cada ciclo celular pela ação do complexo ribonucleoprotéico da telomerase, minimamente composto pelos componentes TERT (transcriptase reversa da telomerase) e TER (RNA da telomerase). Neste projeto, utilizamos o sistema CRISPR-Cas9 idealizado por Beneke et al (2017) para induzir o nocaute dos dois alelos do gene TERT de L. infantum (LiTERT) e avaliar seu papel na homeostase do parasita. Resultados preliminares aqui apresentados mostram o sucesso da edição gênica com a deleção de ambos os alelos do gene TERT e inserção adequada dos cassetes doadores contendo os genes de resistência à puromicina e neomicina no locus LiTERT no cromossomo 36. Southern blot telomérico com DNA genômico extraído de formas promastigotas de passagens precoces (P3) mostrou que os clones selecionados apresentam encurtamento dos telômeros quando comparados a linhagem controle parental. Selecionamos um dos clones para continuar a investigação para verificar se a ausência do componente LiTERT pode alterar o tempo de vida e a integridade genômica do parasita. Diferentes experimentos in vivo e in vitro serão realizados para avaliar o potencial infectivo da linhagem nocaute e verificar se LiTERT poderia ser um potencial alvo terapêutico contra o parasito.