Produção e purificação de minicells de xanthomonas citri para uso em tomografia crioeletrônica (cryo-ET)

• Processo: 24/16240-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Germán Gustavo Sgro
• Beneficiário: Matheus de Lima Ortega
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 22/03018-7 - Caracterização estrutural, molecular e funcional de bacteriófagos associados à bactérias de interesse médico e agrícola, AP.PNGP.PI
• Assunto(s): Divisão celular Xanthomonas citri
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Divisão Celular | Minicells | Tomografia Eletrônica | Xanthomonas citri | Divisão celular e minicells

Resumo

A criação de minicells para visualização de estruturas celulares usando metodologias de microscopia eletrônica (principalmente crio-tomografia eletrônica, cryo-ET) já é uma abordagem conhecida e efetiva, possibilitando visualização maior de detalhes nas pseudo-células diminutas. Em X. citri, uma bactéria relevante por seu impacto na agricultura de cítricos e para o estudo de estruturas celulares como modelo cada vez mais consolidado, já existem algumas cepas com essa capacidade de criação, com uma das mais promissoras sendo a variante ¿minC, mutante de deleção do gene minC envolvido na divisão celular. Dito isso, por conta das modificações no processo de divisão celular dessa cepa, várias dificuldades apresentam-se no seu desenvolvimento: seu crescimento é consideravelmente mais lento que as bactérias selvagens, sua sobrevivência menor e mais curta, e não há na literatura conhecimento o suficiente sobre como contornar esses obstáculos. Dessa forma, também não há um protocolo facilmente disponível para optimizar a obtenção e coleta dessas minicells produzidas por X. citri, havendo a necessidade de que crie-se uma documentação e padronização do mesmo para usos futuros.Além disso, e com o intuito de ampliar e favorecer o desenvolvimento das metodologias que potencializam o uso de minicells para estudos estruturais por microscopia eletrônica, temos também a intenção de usar técnicas de biologia molecular para desenvolver uma série de cepas que combinem diversas das mutações responsáveis pela criação de minicells - estas sendo em genes como minCDE, mreB, ftsQAZ, plsB e plsC - fazendo com que cada uma delas potencialize a ação das outras para o melhor resultado possível ao fim do crescimento e protocolo de separação.Assim, ao fim do projeto esperamos ter facilitado em muito a obtenção de minicells a partir das cepas modificadas e seus respectivos protocolos, permitindo que futuras pesquisas do laboratório das mais variadas, desde estudos de complexos moleculares de membrana até infecção de fagos nas minicells, tenham condições para se desenvolver com maior sucesso.