Análise de Proteínas Chaves da Infecção de Cryptococcus neoformans Diferencialmente Expressas Biofilme/Planctônico em Modelo Tridimensional Pulmonar.

• Processo: 24/15618-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2027
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Farmácia
• Pesquisador responsável: Ana Marisa Fusco Almeida
• Beneficiário: Marcos William de Lima Gualque
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Cryptococcus neoformans Micologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cryptococcus neoformans | Micologia

Resumo

Cryptococcus neoformans é uma levedura de relevância médica, especialmente em pacientes imunocomprometidos, como os afetados pela SIDA. Este fungo é capaz de causar infecções sistêmicas graves e algumas vezes resistentes a medicamentos, sendo responsável por mais de 180 mil mortes anuais no mundo. A infecção ocorre predominantemente pela inalação de propágulos do fungo, levando a uma infecção pulmonar que pode evoluir sistematicamente afetando principalmente o sistema nervoso central. Fatores de virulência desta levedura encapsulada incluem a presença de uma cápsula polissacarídica, proteínas como melanina, fosfolipase e urease, além da capacidade de formar biofilmes e, consequentemente estipes altamente resistentes. Adicionalmente, a formação de biofilmes dificulta a fagocitose e a permeação de fármacos prejudicando a eficácia dos tratamentos antifúngicos. Modelos tridimensionais de cultura celular são promissores para estudar a interação fungo-hospedeiro, proporcionando um ambiente mais representativo das condições in vivo e ajudando a desenvolver novas intervenções terapêuticas para a criptococose. Com o propósito de avaliar proteínas associadas à virulência do biofilme de Cryptococcus neoformans em modelo tridimensional pulmonar, este estudo tem como finalidade avaliar o perfil proteômico diferencial do biofilme de C. neoformans através da infecção no modelo tridimensional pulmonar composto pelas linhagens MRC-5, A549 e THP-1, realizar a quantificação de transcritos das proteínas diferencialmente expressas biofilme e planctônico infectados no modelo tridimensional utilizando espectrometria de massas e ferramentas de bioinformática, verificar a expressão relativa de genes associados a proteínas de interesse pelo método de qRT-PCR, e por fim validar estas proteínas na infecção comparando modelo monocamadas e tridimensional por meio da quantificação da fluorescências com marcações específicas em microscopia multifotônica. Com os dados obtidos pretende-se abrir uma gama de possibilidades, desses marcadores de biofilme até possíveis alvo terapêuticos.