Plataforma de proposta vacinal contra a Raiva, utilizando mRNA-RVGP do vírus rábico em nanopartículas lipídicas

• Processo: 24/20247-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2025
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2025
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Saúde Coletiva - Medicina Preventiva
• Pesquisador responsável: Soraia Attie Calil Jorge
• Beneficiário: Samanta Omae Camalhonte
• Instituição Sede: Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 24/05287-0 - Plataforma de proposta vacinal contra a Raiva, utilizando mRNA-RVGP do vírus rábico em nanopartículas lipídicas, AP.R
• Assunto(s): Glicoproteínas RNA mensageiro Nanopartículas Raiva Biotecnologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: glicoproteina | mRNA | Nanopartículas | Raiva | Biotecnologia

Resumo

A sequência RVGP do vírus rábico será clonada no pVAX e pET (alternativamente outros plasmídeos poderão ser testados, inclusive vetores para mRNA auto-replicativos) através da utilização de enzimas de restrição e da T4 DNA ligase e/ou o sistema InFusion (Takara). Os vetores serão amplificados mediante a transformação de bactérias competentes da cepa Escherichia coli DH5¿ crescidas em meio LB com antibiótico (ampicilina ou kanamicina). O DNA plasmidial será extraído e purificado com o kit Maxiprep Plasmid (Qiagen, Valencia, CA., U.S.A.), conforme instruções do fabricante. A quantificação do DNA será determinada por fluorimetria através do equipamento Qubit (Invitrogen, Carlsbad, CA, U.S.A), e a presença do plasmídeo confirmada por análise de padrões de restrição e eletroforese em gel de agarose. Os plasmídeos obtidos serão linearizados com enzimas de restrição apropriadas. Os DNAs linearizados serão usados como molde para geração de RNA, através de um processo de transcrição in vitro, usando o kit MAXIScript T7 (Life Technologies, Carlsbad, U.S.A.), conforme instruções do fabricante com a adição dos reagentes CAPanalog (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA.), Ribolock (Thermo Scientific, Vilnius, Lituânia) e ribonucleotídeos modificados. A eficiência da transcrição será verificada usando eletroforese em gel de agarose 0,8%. Os transcritos serão purificados e utilizados para encapsulação por lipídeos- LNP. As LNP serão preparadas através de microfluidizador. Diferentes combinações lipídicas serão utilizadas.