Efeitos de diferentes ácios graxos na geração de espécies reativas de oxigênio e no potencial de membrana mitocondrial em embriões bovinos produzidos in vitro.

• Processo: 24/22197-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Claudia Maria Bertan Membrive
• Beneficiário: Catarina Lazarevicius Prestes
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Tecnológicas. Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Dracena. Dracena , SP, Brasil
• Assunto(s): Bovinos Embrião Espécies de oxigênio reativas Estresse oxidativo Mitocôndrias
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovino | embrião | espécies reativas de oxigênio | Estresse oxidativo | mitocôndria | Ômega | Produção de embriões bovinos in vitro

Resumo

A manipulação exercida em oócitos e embriões na execução da produção in vitro de embriões (PIVE), assim como as próprias condições de cultivo, reconhecidamente se associam para promover o estresse oxidativo (EO). O EO é caracterizado pelo desequilíbrio entre a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) e a remoção das mesmas através de sistemas enzimáticos ou não. Os EROs determinam danos celulares e favorecem o desencadeamento dos mecanismos apoptóticos. É de grande interesse o aperfeiçoamento das condições de cultivo de embriões bovinos durante a PIVE. A adição de ácidos graxos (AGs) ao meio de cultivo pode contribuir para reduzir o EO incrementar a qualidade dos embriões produzidos comercialmente in vitro. Algumas estratégias utilizando os ácidos graxos poliinsaturados (AGPI) da família ômega 6 (n-6), como o ácido linoleico conjugado (CLA) ou ácido linoleico não conjugado (AL), vem sendo investigadas por este grupo (Processos FAPESP 2018/24168-1 e 2022/01110-3). O ácido oleico (AO), um ácido graxo monoinsaturado da família omega 9, também foi relacionado a capacidade de redução do EO. A hipótese é que a suplementação com CLA, AL ou AO no meio de cultivo in vitro (CIV) reduz o EO, contribuindo para o incremento na produção embrionária. Assim, objetiva-se avaliar os efeitos da suplementação com AL (C18:2n-6, ômega-6), CLA (isômeros cis-9, trans-11 e trans-10, cis-12, ômega-6) e ácido oleico (AO; C18:1, ômega-9) no EO; através da mensuração de EROs e do potencial de membrana mitocondrial; em embriões produzidos in vitro no D8 (D0 = dia da fertilização in vitro). Para tanto, utilizaremos um delineamento 4 x 1, com quatro tratamentos (Controle, 100 uM CLA, 100 uM AL e 100 uM AO) em um único momento (CIV). Serão realizadas um total de 8 repetições. Em fêmeas Nelore abatidas, folículos ovarianos com 2 a 10 mm de diâmetro serão aspirados utilizando uma seringa de 10 mL acoplada a agulha 18G. Oócitos com citoplasma homogêneo e múltiplas camadas de células do cumulus serão submetidos à maturação in vitro (MIV) em gotas de 100 ¿L contendo meio MIV com 5% de soro fetal bovino (SFB) sob óleo mineral, em incubadora a 38,5 o C em atmosfera umidificada a 5% de CO2 por 24 horas. Após a MIV, os oócitos serão submetidos a fertilização in vitro (FIV), com sêmen de único touro Nelore, durante 18 horas nas mesmas condições da MIV (D0). Após a FIV, os prováveis zigotos serão alocados em placas de 4 poços com 700 µL de meio de cultivo/poço com 1,25% de SFB, acrescidos dos seguintes tratamentos: 100 ¿M de ácido linoleico conjugado (Grupo CLA); 100 ¿M de ácido linoleico (Grupo AL) ou 100 ¿M de ácido oleico (Grupo AO); além de meio não acrescido de AG (Grupo Controle). A taxa de clivagem será avaliada 30 horas após o início da FIV. O desenvolvimento embrionário será monitorado no D3 e D7. No D8 os embriões serão avaliados, pelo uso de sondas fluorescentes, quanto a geração de EROs pelo CellROX¿ e atividade mitocondrial pela MitoTracker¿ Red CMXRos. Espera-se com o referido estudo possa contribuir para o aprimoramento do atual sistema de cultivo utilizado na PIVE, tornando o sistema comercial mais promissor em converer oócitos maturados em embriões com qualidade para serem transferidos.