Estabelecimento de linhagem celular suína transgênica com potencial de escape imunológico para xenotransplante em humanos.

• Processo: 25/00515-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2025
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Animal
• Pesquisador responsável: Silvano Mario Attilio Raia
• Beneficiário: Letícia Rocha da Silva
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/11872-5 - Centro de Ciência para o Desenvolvimento em Xenotransplante, AP.CCD
• Assunto(s): Fibroblastos Linhagem celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: fibroblastos | Linhagem Celular | xenotransplante | Xenotransplante

Resumo

O campo do xenotransplante tem avançado substancialmente nos últimos anos, impulsionado pela evolução das tecnologias de edição gênica. Dentre os modelos experimentais, os suínos destacam-se como doadores preferenciais deórgãos devido às suas características reprodutivas favoráveis e às homologias anatômicas e fisiológicas com os primatas.Todavia, a implementação clínica do xenotransplante enfrenta barreiras imunológicas significativas, resultantes da interaçãoentre componentes da imunidade inata e adaptativa, disfunções na hemostasia e estados pró-inflamatórios. Esses mecanismos envolvem o reconhecimento alogênico por anticorpos pré-formados e subsequente ativação de linfócitos T,células NK e macrófagos. Diversos fatores moleculares estão implicados nas vias de rejeição, destacando-se PDL1 e CD47,reguladores negativos da resposta imune celular, CD46, modulador das vias do complemento, além de HO-1 e TBM, quedesempenham papéis cruciais na modulação da resposta inflamatória e na homeostase da coagulação. Ensaios experimentais in vitro e in vivo evidenciam que a inserção transgênica dessas proteínas humanas em células suínas atenuaa resposta imunológica do hospedeiro e confere maior viabilidade ao órgão transplantado. O presente estudo propõe a transfecção de células primárias de origem suína (fibroblasto e endoteliais), a fim de editada-las, gerando nocaute dos genes GGTA1, BGalNT2 e CMAH, e realizar o knock in com vetores baseados no sistema de transposon piggyBac contendo as ORFs dos genes humanos supracitados, utilizando a técnica de eletroporação por pulsos de alta intensidade(Neon). A validação, tanto dos knock outs como dos knock-ins, a caracterização fenotípica e a quantificação da expressãotransgênica serão realizadas por sequenciamento genômico de nova geração, citometria de fluxo, RT-qPCR e Western blot.Espera-se, assim, obter uma linhagem celular geneticamente modificada com potencial para minimizar as respostas alogênicas e superar as limitações imunológicas que comprometem a viabilidade do xenotransplante em modelospré-clínicos.