Desenvolvimento de dispositivos microfluídicos para o isolamento e análise de vesículas extracelulares de meios de cultivo de embriões

• Processo: 25/00727-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 16 de junho de 2025
• Data de Término da vigência: 15 de junho de 2026
• Área de conhecimento: Interdisciplinar
• Pesquisador responsável: Juliano Coelho da Silveira
• Beneficiário: Franciele Flores Vit
• Supervisor: Ming Dao
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Massachusetts Institute of Technology (MIT), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 22/02701-5 - Criação de dispositivos microfluídicos com geometrias diferentes para fertilização in vitro, BP.PD
• Assunto(s): Vesículas extracelulares Microfluídica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: embryos | extracellular vesicles | Immunoaffynity | Microdevice | Microfluidic | Size exclusion chromatography (µSEC) | Microfluidica

Resumo

A avaliação da qualidade dos embriões é de extrema importância no âmbito das tecnologias de reprodução assistida (TRA) para otimizar a implantação e os resultados da gravidez. As vesículas extracelulares (VEs) estão envolvidas na comunicação intercelular e foram consideradas como um potencial biomarcador para a avaliação não invasiva da qualidade embrionária. Assim, o objetivo deste projeto é desenvolver e comparar dois dispositivos microfluídicos para o isolamento de vesículas extracelulares (VEs) de meios de cultura de embriões de rato. Um dispositivo utilizará a cromatografia de exclusão de tamanho (µSEC), enquanto o outro utilizará a imunoafinidade com anticorpos específicos direcionados para marcadores de VEs. O dispositivo µSEC será desenvolvido para separar VEs presentes em pequenos volumes de amostra, enquanto o dispositivo baseado em imunoafinidade será funcionalizado com anticorpos direcionados para CD63, CD81 e CD9. As VEs serão isoladas a partir de meio de cultivo de embriões de camundongo após quatro dias de cultivo. A concentração, tamanho, morfologia e conteúdo de RNA das vesiculas extracelulares serão analisadas por meio de análise de rastreamento de nanopartículas (NTA), microscopia eletrónica de transmissão (TEM), citometria de fluxo e a extração de RNA. A intenção é avaliar a eficiência e a especificidade de cada método para isolar EVs derivados do cultivo de embriões, contribuindo assim para avanços na avaliação não invasiva da qualidade dos embriões. A implementação destes dispositivos microfluídicos tem o potencial de melhorar os protocolos de seleção de embriões, melhorando assim os resultados obtidos pelas tecnologias de reprodução assistida.