Efeitos dos tratamentos com melatonina e 17beta-estradiol em camundongos com edição genética CRISPR/Cas9 e carcinoma mamário induzido

• Processo: 25/08621-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 08 de setembro de 2025
• Data de Término da vigência: 07 de setembro de 2026
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
• Pesquisador responsável: Edmund Chada Baracat
• Beneficiário: Bruna Cristine de Almeida
• Supervisor: Carol Fuzeti Elias
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Michigan, Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 22/04174-2 - Efeitos da melatonina e do 17beta-estradiol no perfil de expressão de microRNAs e seus alvos no carcinoma ductal invasivo de mama, BP.PD
• Assunto(s): Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Estrógenos Melatonina Ginecologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: carcinoma ductal invasivo | Crispr | Estrogênio | melatonina | Ginecologia

Resumo

Os microRNAs (miRNAs) são pequenas moléculas não codificadoras que atuam na regulação da expressão gênica. Sua expressão anormal está associada a transformação celular, comprometimento da resposta terapêutica e pior prognóstico no carcinoma mamário, devido aos efeitos regulatórios em importantes vias de sinalização. Adicionalmente, sabe-se que um desbalanço na sinalização pelo estrogênio (E2) está frequentemente associado ao surgimento do câncer de mama. Atualmente, há grande interesse na identificação de substâncias moduladoras da expressão de miRNAs que podem ser utilizadas para terapia alvo em diversas doenças. Nesse contexto, a melatonina tem sido descrita como reguladora de miRNAs, inibindo o risco de malignização celular. Assim, o presente trabalho tem como objetivos: 1) identificar os miRNAs diferencialmente expressos em linhagens de células de carcinoma ductal invasivo (CDI) estimuladas ou não com E2 e tratadas com melatonina; 2) identificar, nas células tratadas, os principais genes alvo com regulação diferencial; 3) validar funcionalmente, in vitro e in vivo, por manipulação genética, o papel dos miRNAs envolvidos na regulação do E2, após tratamento com melatonina. Para este propósito, as linhagens celulares CDI, T47D, MCF7 (tipos luminal A) e MDA-MB-231 (tipo triplo negativo) serão utilizadas após tratamento com melatonina e E2, e amostras tumorais de pacientes com os mesmos tipos moleculares serão avaliadas. O perfil de expressão de miRNAs e genes alvos será avaliado em células e tecidos usando as plataformas de análise de array qRT-PCR. A validação funcional será realizada usando siRNAs (silenciamento) ou mimetizadores (indução), enquanto o efeito dos tratamentos de manipulação genética no fenótipo das células será analisado por ensaios de proliferação, migração e invasão celular. Com base nos resultados obtidos, um gene alvo será selecionado para manipulação genética (CRISPR-Cas9) e inoculação no modelo animal. Esta etapa será realizada em colaboração com a Universidade de Michigan Ann Arbor, sob a supervisão da Profa. Dra. Carol Fuzeti Elias. A proposta inovadora deste projeto é a avaliação dos efeitos genéticos e epigenéticos do tratamento com melatonina após indução celular com E2 (isolado e combinado) em CDI, que faz parte de um Projeto Temático (2018/24224-9) e do projeto de pós-doutorado FAPESP nº 2022/04174-2, financiado por esta agência de fomento. Os resultados obtidos poderão trazer informações novas e relevantes sobre a biologia desses tumores e seu manejo clínico. (AU)