Desenvolvimento de painel molecular e sorológico multiplex para diagnóstico de Patógenos de Importância clínica para realização de Xenotransplantes

• Processo: 25/04517-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2028
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Animal
• Pesquisador responsável: Silvano Mario Attilio Raia
• Beneficiário: Luiz Gustavo Cano Munhoz
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/11872-5 - Centro de Ciência para o Desenvolvimento em Xenotransplante, AP.CCD
• Assunto(s): Ensaio de imunoadsorção enzimática
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Elisa | luminex | painel molecular | xenotransplante | Xenotransplante

Resumo

A escassez da doação de órgãos no mundo é considerada uma grande barreira para transplantes. Em vista disso, o xenotransplante surge como uma importante alternativa para suprir a escassez de órgãos necessários para transplantes. Os suínos apresentam rápida maturação, prole numerosa e características fisiológicas semelhantes aos humanos, características estas que os tornam candidatos ideais para serem doadores para xenotransplante. No entanto, esses animais podem transmitir patógenos zoonóticos capazes de causar sérios prejuízos ao receptor do órgão. Dessa maneira, faz-se necessário o monitoramento constante dos animais, ambiente ("pig facilities") e indivíduos que os manejam, para a manutenção do status: SPF (Specific pathogen-free) e DPF (Designated pathogen-free). Atualmente, a reação da cadeia em polimerase em tempo real (qPCR) é considerada a melhor alternativa para detecção de patógenos virais, devido ao baixo risco de contaminação, custo-benefício, possibilidade de ensaios simultâneos (multiplex), execução rápida e baixo limite de detecção, podendo chegar a 1 cópia/mL dependendo do patógeno avaliado. Apesar disso, determinados patógenos, podem apresentar fases de latência, caracterizadas por baixa ou nenhuma replicação viral9, impossibilitando a sua detecção por métodos moleculares e, portanto, a garantia de diagnóstico negativo confiável, sendo necessário a associação de um método de diagnóstico imunológico10, como o ELISA Indireto e Luminex xMAP que são capazes de detectar anticorpos específicos produzidos contra o patógeno de interesse tanto em formato singleplex quanto multiplex respectivamente. Após a revisão da literatura, definimos a escolha de 11 patógenos considerados importantes para xenotransplante por especialistas do mundo todo6,8,12. Assim o presente projeto tem por objetivo principal a construção de um painel molecular multiplex (qPCR) e sorológico (ELISA e LUMINEX) comparáveis aos testes considerados padrão ouro atualmente. Serão avaliadas amostras biológicas de sangue, soro, sêmen, swabs e tecidos de 100 suínos de granja comercial e abatedouros. Uma vez definidos os parâmetros analíticos dos testes, elaboraremos protocolos operacionais de testagem de animais e superfícies, por meio dos quais iniciaremos o povoamento de duas pig facilities que se encontram em construção.