Papel dual de ncRNAs associados a R-loops em resposta ao estresse replicativo e na regulação da expressão gênica em L. major

• Processo: 25/05210-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Angela Kaysel Cruz
• Beneficiário: Amanda Cristina Severino
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 23/03015-0 - Da epigenética, variabilidade genômica e regulação da expressão gênica em Leishmania, AP.TEM
• Assunto(s): Expressão gênica Leishmania
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Estresse replicativo | expressão gênica | leishmania | ncRNA | R-loops | Genética molecular de Leishmania

Resumo

A leishmaniose é uma doença negligenciada causada por protozoários do gênero Leishmania, com formas visceral e tegumentar, afetando mais de 90 países. Além de sua relevância médica, o parasita é um modelo genético devido à sua posição evolutiva. A regulação da expressão gênica é crucial para seu ciclo de vida, envolvendo RNAs não codificantes (ncRNAs) na regulação pós-transcricional. Recentemente, foram identificados ncRNAs associados ao DNA formando R-loops, que podem atuar na estabilidade genômica, replicação e plasticidade genética desses organismos. Serão estudados nesta proposta ncRNAs identificados em associação a R-loops em Leishmania major. Entre eles, encontram-se dois ncRNAs, ncRNA_ODD3 e ncRNA_c12, detectados no núcleo e no citoplasma, que atuam como fatores de regulação de expressão gênica e localizam-se em regiões do genoma enriquecidas para R-loops. Com a hipótese de que estes transcritos, e outros semelhantes, possam desempenhar papéis distintos enquanto ncRNA livres ou em associação a R-loops, objetivamos investigar uma possível atuação dual, com eventual envolvimento no estresse replicativo e papel desses ncRNAs em L. major na regulação da expressão gênica. Dois ncRNAs ainda não estudados, ncRNA19 e ncRNA25, serão incluídos no estudo para buscar possíveis características comuns aos ncRNAs associados a R-loops. A atuação dual de 2 destes ncRNAs, seja no contexto de R-loop ou livre, será examinada por ensaios de pulldown in vitro e participação dos ncRNAs nos R-loops será confirmada por smRNA FISH, utilizando uma linhagem de nocaute condicional de RNAse H1. Além disso, a possível atuação trans-regulatória do ncRNA19 e/ou ncRNA25 será investigada por meio de parasitos nocaute e superexpressores gerados por CRISPR/Cas9. (AU)