CRISPR/Cas9n nickase como estratégia de correção da variante patogênica c.5047C>T causadora da Epidermólise Bolhosa Distrófica Recessiva

• Processo: 25/05454-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Priscila Keiko Matsumoto Martin
• Beneficiário: Laurent Ketlen Leão Viana
• Instituição Sede: Instituto Israelita de Ensino e Pesquisa Albert Einstein (IIEPAE). Sociedade Beneficente Israelita Brasileira Albert Einstein (SBIBAE). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Epidermólise bolhosa Terapia genética Biologia molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cas nickase | Crispr | edições de bases | epidermolise bolhosa | terapia genica | Biologia Molecular

Resumo

A Epidermólise Bolhosa (EB) é uma doença rara de origem genética e cutânea, e entre suas principais características está a formação de bolhas e erosões causadas por pequenos atritos na pele frágil, que surgem logo após o nascimento, sendo uma doença sem cura até o momento. A EB é dividida em quatros subtipos clássicos: EB simples (EBS), EB juncional (EBJ), EB distrófica (EBD) e EB Kindler (EBK), e cada subtipo apresenta 3 graus de gravidade fenotípica. A Epidermólise Bolhosa Distrófica Recessiva (EBDR) é um dos subtipos mais graves, e suas mutações ocorrem no gene COL7A1, responsável por codificar o colágeno VII, principal proteína das fibrilas de ancoragem e importante estrutura para o processo de junção da derme e epiderme. No Brasil, a mutação c.5047C>T é uma das mais frequentes e surge a partir da formação de um códon de parada, no qual a transcrição do gene é interrompida e leva a deficiência na produção do colágeno VII. Atualmente, alguns estudos baseados em terapia gênica, CRISPR/Cas9 e suas derivações estão sendo explorados como possível terapia para EBDR. A proposta principal do presente projeto é otimizar a ferramenta de edição CRISPR/Cas9n nickase para correção da variante patogênica c.5047C>T. Essa ferramenta pode se tornar muito promissora ao serem avaliadas melhorias na recombinação homóloga através de estratégias de desenho de oligos 5´e 3´overhang complexados. Além disso, faz-se necessário o desenvolvimento de melhores ferramentas que possam ser transpostas para outras variantes causadoras da EB, incluindo deleções e inserções no gene COL7A1.