Detecção e qualificação de Xylella fastidiosa com o uso de real time (PCR) e hibridização fluorescente in situ (FISH) usando os genes que codificam para o 16S rRNA e virulência

• Processo: 00/13160-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2001
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Tsai Siu Mui
• Beneficiário: Jorge Luiz Mazza Rodrigues
• Instituição Sede: Centro de Energia Nuclear na Agricultura (CENA). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil

Resumo

A doença clorose variegada do citrus causada por Xylella fastidiosa, tem como principal método de controle a erradiação extensiva de pomares. Assim, um método de detecção de X. fastidiosa em estágio inicial para prevenção desta doença se faz necessário. Entretanto, métodos tradicionais de cultivo seguidos de testes bioquímicos, serológicos e de patogenicidade são demorados e trabalhosos e testes moleculares não apresentam a especificidade requerida evitando resultados falso positivos. O seqüenciamento completo do genoma de X. fastidiosa permitiu a seleção de genes específicos ao microorganismo para o desenvolvimento de um método rápido de dignóstico (resultado em horas), sensível (detecção de uma célula por ml) e específico (sem falso positivo) para a detecção deste microorganismo. Este projeto utiliza-se da técnica de real time PCR para o desenvolvimento de sondas de oligonucleotídeos específicos ao gene ribossômico 16S RN A e dois possíveis genes relacionados à virulência. Estas sondas possuem uma molécula repórter que emitirá fluorescência durante a atividade exonuclease da enzima Taq polimerase, permitindo a detecção do produto de PCR ao mesmo tempo que a reação está ocorrendo, em correlação com o número de células do patógeno no tecido vegetal. Sonda baseada no gene 16S rRNA será também utilizado para hibridização fluorescente in situ. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

RODRIGUES‚ J.L.M.; SILVA-STENICO‚ M.E.; DE SOUZA‚ A.N.; LOPES‚ J.R.S.; TSAI‚ S.M.. In situ probing of Xylella fastidiosa in honeydew of a xylem sap-feeding insect using 16S rRNA-targeted fluorescent oligonucleotides. ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, v. 8, n. 4, p. 747-754, 2006. (98/16265-1, 00/10168-6, 00/13160-6, 00/08045-3)