Mutagênese sitio dirigida na região do sitio ativo de Botropstoxina-I de Bothrops jararacussu

• Processo: 01/04308-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2001
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2002
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Richard John Ward
• Beneficiário: Wagner Rodrigo de Souza
• Instituição Sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Mutagênese sítio-dirigida Cinética Fosfolipídeos Hidrólise Bothrops
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Mutagenese Sitio Dirigida

Resumo

Botropstoxina-I (BthTX-I) é um fosfolipase A2 lisina 49 isolada do I veneno da serpente Bothrops jararacussu, que apresenta uma atividade catalítica extremamente baixa. A base estrutural desta perda de atividade catalítica é uma questão ainda aberta, e uma análise da sequência de amino ácido de BthTX-I revela várias substituições na região do sítio ativo e a alça de ligação do co-fator Ca2+, as quais são únicas para as PLA2-Lis49. Utilizando um sistema de expressão em E. coli e purificação da proteína recombinante, substituições de dois aminos ácidos Asn28His e Leu32Gli no sítio ativo serão feitas através da técnica de mutagênese sítio-dirigida. A cinética da atividade catalítica das proteínas recombinantes mutadas será monitorizada através de espetroscopia de "stopped flow", para avaliar os efeitos da conformação e flexibilidade da alça de ligação de Ca2+ na hidrolise de fosfolipídeos. (AU)