Composicao da holoenzima telomerase de tripanosomatideos e suas interacoes com os componentes do complexo telomerico.

• Processo: 07/53785-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Maria Isabel Nogueira Cano
• Beneficiário: Adriano Figueiredo Monte Alegre
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Telomerase Tripanossomíase
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Co-Imunoprecipitacao | Epitope-Tagging | Proteinas Telomericas | Subunidades | Telomerase | Tripanosomatideos

Resumo

À semelhança de outros eucariotos os telômeros de tripanosomatídeos também são replicados por ação da telomerase. Além das subunidades TERT e TER, a atividade de telomerase está intimamente relacionada a proteínas que se ligam a dupla fita e a simples fita dos telômeros e a proteínas que fazem parte do complexo holoenzimático.O objetivo desta proposta é de se identificar possíveis subunidades da holoenzima e as proteínas que interagem com a telomerase em tripanosomatídeos usando ensaios de "epitope-tagging" e co-imunoprecipitações e posterior identificação dos polipeptídios isolados por espectrometria de massa. Tentaremos igualmente verificar as possíveis interações entre a LaRapl e LaTRF2 com a telomerase e seus complexos associados utilizando-se co-imunoprecipitações com identificação cruzada a partir de anticorpos específicos. A medida indireta da atividade telomerase entre os diferentes clones que estarão superexpressando a LaRapl e a LaTRF2 poderá auxiliar no esclarecimento da ação dessas proteínas para a manutenção da atividade da telomerase. Ensaios de imunofluorescência indireta e hibridização in situ acoplada a imunofluorescência serão utilizados para estudar a sublocalização celular das proteínas e de seus fatores de interação, assim como possíveis alterações fenotípicas em transfectantes superexpressores e clones selvagens. (AU)