Construcao e caracterizacao do mutante dps-nulo de salmonella enterica

• Processo: 03/07579-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2003
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Marcelo Brocchi
• Beneficiário: Karen Menegheli Gatti Alves de Sousa
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Salmonella Virulência
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Dps | Patogenicidade | Salmonella

Resumo

Microrganismos são comumente expostos a ambientes de carência nutricional, e desenvolveram um sistema de resistência, onde formam estruturas intracelulares muito organizadas, independente de energia, na qual moléculas de DNA são seqüestradas e estruturalmente protegidas. Esse mecanismo foi bem caracterizado em Escherichia coli, que produz uma proteína ligante de DNA denominada Dps (DNA binding protein from starved cells). Uma proteína de 18 kDa, purificada do antígeno bruto de S. enterica Typhimurium, com seqüenciamento parcial apresentando 100% de homologia com a Dps dessa espécie, foi isolada e caracterizada por sua habilidade de ligar-se à jacalina imobilizada. A fração homóloga à Dps de S. enterica Typhimurium (DpsJac+) mostrou afinidade e especificidade de ligação à Jacalina em ensaios lectino-enzimáticos, e análises de espectrometria de massa (ESI-MS) com a proteína nativa, e após tratamento químico com TFMS, indicaram que a fração purificada seja glicosilada. Ressalta-se que a glicosilação em Dps abre novas perspectivas ao estudo de glicoproteínas bacterianas. Neste projeto propomos um estudo direcionado da glicosilação em Dps através da mutação do gene dps, com intuito de determinar suas conseqüências sobre esse fenômeno, avaliando, posteriormente, os efeitos da reversão dessa mutagênese no processo de acoplamento de glicanas à molécula de Dps. (AU)