Expressao do gene hxyn2 em pichia pastoris: analise da estabilidade genetica dos transformantes.

• Processo: 01/11247-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2002
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Maria das Graças de Almeida Felipe
• Beneficiário: Andreia Aparecida Banhe
• Instituição Sede: Faculdade de Engenharia Química de Lorena (FAENQUIL). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). Lorena , SP, Brasil
• Assunto(s): Pichia pastoris Expressão heteróloga
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Endoxilanase | Expressao Heterologa | Pichia Pastoris

Resumo

Um dos genes de endoxilanase do fungo Humicola grisea var. thermoidea denominado Hxyn2 foi isolado e incluí três exons com os tamanhos de 74 e 57 pb e dois introns com os tamanhos de 74 e 57 pb, totalizando 815 pb. O gene Hxyn2 codifica uma endoxilanase da familia G/11 com massa molecular de 25 kDa. A estrutural tridimensional da proteína HXYN2 foi resolvida por modelagem e demonstrou tratar-se de uma xiíanase composta por um único domínio catalítico. Para a produção e caracterização bioquímica da proteína HXYN2 recombinante foi escolhido como sistema de expressão a levedura Pichia pastoris. Para a expressão em P. pastoris o cDNA-xyn2 será clonado no vetor de expressão pHILD2 e o vetor recombinante será utilizado para a transformação da linhagem GS115 de P. pastoris. No presente trabalho, será analisada a estabilidade genética dos transformantes. Os possíveis transformantes serão confirmados por cultivo em meio seletivo por 3 gerações e análise da integração do gene Hxyn2 no genoma da levedura por PCR. Por essa metodologia será também analisado o perfil de integração do cassete de expressão pela à amplificação do gene AOX1. (AU)