Expressão, purificação e cristalização da proteína humana alpha4 (IGBP1)

• Processo: 03/01901-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2003
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Nilson Ivo Tonin Zanchin
• Beneficiário: Juliana Helena Costa Smetana
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 00/02788-4 - Determinação da estrutura tridimensional das proteínas TRIP-1 e INT6 e caracterização da função da INT6 no controle da proliferação celular e na iniciação da tradução, AP.JP
• Assunto(s): Sirolimo Cristalografia Monoester fosfórico hidrolases Transdução de sinais Cristalografia de proteínas Purificação de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Alpha4 | Ativacao De Linfocitos B | Cristalografia | Rapamicina | Sinalizacao | Tor

Resumo

A proteína humana alpha4 e sua homóloga em levedura, Tap42p, atuam como reguladoras da atividade da sub-unidade catalítica da proteína fosfatase 2A (PP2A). Em levedura, o complexo Tap42p-PP2A faz parte da via de sinalização sensível a rapamicina, que conecta a disponibilidade de nutrientes ao crescimento celular, e em mamíferos a proteína alpha4 participa da sinalização intracelular que ocorre na ativação de linfócitos B. A família de proteínas que inclui alpha4 e Tap42p parece estar presente em todos os eucariotos e, em organismos multicelulares, é encontrada em quase todos os tecidos. Nenhuma das proteínas dessa família teve sua estrutura terciária resolvida. Este projeto se propõe a cristalizar a proteína alpha4 humana para que, posteriormente, sua estrutura possa ser determinada por difração de raios-X. A proteína será expressa em E. coli fusionada a uma cauda de polihistidina e purificada por afinidade em coluna de metal imobilizado. Uma vez obtidos os cristais, estes serão expostos a raios-X provenientes da fonte de luz síncrotron para a determinação do grupo espacial e das dimensões da célula unitária e, com essas informações, será estabelecida a estratégia de coleta de dados de difração e resolução de sua estrutura 3-D. (AU)