Producao de mmp-2 recombinante.

• Processo: 07/51829-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Periodontia
• Pesquisador responsável: Raquel Fernanda Gerlach
• Beneficiário: Andrezza Neves Rodrigues
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Gelatinases Proteínas recombinantes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Gelatinases | Mmp 2 | Proteina Recombinante

Resumo

As metaloproteases da matriz (matrix metalloproteinases, MMPs) são enzimas proteolíticas que participam de vários processos fisiológicos e patológicos no organismo de vertebrados. Entre as 28 enzimas descritas, a MMP-2 e a MMP-9 são classificadas como gelatinases pela afinidade por esse substrato. Essas 2 MMPs têm um domínio com afinidade por gelatina que permite também que elas sejam purificadas em colunas de gelatina. Em nosso laboratório, preparamos zimogramas reversos com gelatinases purificadas nessas colunas para detecção e quantificação dos TIMPs (que são os inibidores naturais das MMPs). Os zimogramas reversos são ensaios nos quais gelatina e gelatinase(s) são co-polimerizados em um gel do tipo SDS-PAGE. Apesar de termos tido algum sucesso com esses géis, a sensibilidade está muito baixa, e isso irá melhorar com a co-polimerização de gelatinase recombinante (MMP-2) no gel (que estará livre de TIMPs e outras proteínas como fibronectina, que são co-purificadas nas colunas de gelatina). Assim, o objetivo desse projeto é produzir a MMP-2 recombinante humana, para, mais tarde, utilizarmos essa proteína recombinante nos ensaios de zimografia reversa. Esse projeto visa especificamente produzir a MMP-2 recombinante humana por meio da clonagem do cDNA da MMP-2 humana e expressão dessa proteína em bactérias, testando depois sua atividade com substrato fluorimétrico DQ-Gelatin. (AU)