Clonagem e caracterizacao do gene hmg-d de rhynchosciara americana.

• Processo: 04/10352-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Fábio Siviero
• Beneficiário: Amanda dos Santos Brandão
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Rhynchosciara americana Amplificação de genes Cromatina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Amplificacao Genica | Cromatina | Ligante De Dna | Politenia | Rhynchosciara Americana

Resumo

Este projeto visa caracterizar o gene que codifica a putativa proteína HMG-D e estudar suas possíveis funções na organização funcional da cromatina em regiões de amplificação gênica (pufes de DNA) de cromossomos politênicos de Rhynchosciara americana. A proteína candidata foi selecionada em um banco de cDNA seqüenciado recentemente em nosso laboratório. Este banco foi construído a partir de um tecido larval (glândula salivar) no momento em que se inicia o último ciclo de politenia, fase em que ocorre também o fenômeno de amplificação gênica. Com a finalidade de caracterizar o putativo gene HMG-D e seu possível envolvimento com a estrutura dos cromossomos politênicos pretende-se que o aluno isole a região genômica correspondente a partir de um banco genômico construído em bacteriófago (lambda DASH II) utilizando como sondas para a varredura os cDNAs clonados e seqüenciados disponíveis. Após a identificação dos fagos recombinantes suas porções codificantes serão seqüenciadas por "shotgun" e por "primer walking", e seu o padrão de expressão em glândulas salivares ao longo do desenvolvimento será caracterizados através de "Northern Blots". Os dados e clones obtidos pelo aluno auxiliarão na localização cromossômica deste gene através de marcações in situ, bem como para a determinação do perfil de expressão em outros tecidos. (AU)