Producao e caracterizacao dos meio-barris (b/a)r e de um barril truncado (b/a)6 a partir do barril (b/a) 8 da beta-glicosidase de spodoptera frugiperda

• Processo: 10/50871-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2010
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Sandro Roberto Marana
• Beneficiário: Daniela Beton
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 08/55914-9 - (bioen/pronex FAPESP) Development of beta-glycosidases designed to improve the efficiency of noncomplexed cellulase systems, AP.BIOEN.TEM
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: (A/B)8 Barril | Barril Tim | Beta Glicosidase

Resumo

O (b/a)8 barril ou barril TIM é o dobramento mais comum entre proteínas, sendo em sua maioria enzimas dentre as quais as glicosídeo hidrolases são o maior grupo. Propõe-se que os (b/a)8 barris atuais resultem de um processo de evolução divergente, no qual o ancestral seria um módulo (b/a)4 (meio-barril) que sofreu duplicação e fusão seguido por divergência de função. Alternativamente sugere-se que no processo de evolução divergente o ancestral seria um módulo (b/a)2, tendo o barril (b/a)8 surgido a partir de um barril (b/a)6. De qualquer modo, estas duas hipóteses propõem que o barril (b/a)8 surgiria pela adição de módulos, sugerindo que funções e/ou propriedades poderiam ter sido adicionadas ao barril final, no qual poderiam ter uma distribuição diferencial. Assim, diferentes módulos (b/a)4 ou (b/a)2 poderiam ser responsáveis pelas diversas propriedades finais da enzima. Neste projeto pretende-se abordar esta questão tomando como modelo experimental a beta-glicosidase de Spodoptera frugiperda (sfbgli; AF 052729) pertencente à família 1 das glicosídeo hidrolases. Para tal, serão produzidas como proteína recombinante as metades N e C-terminais (meio-barris (b/a)4) de sfbgli, além de um barril (b/a)6 através da remoção do último módulo (b/a)2 (fitas b 7 e 8 e a - hélices 7 e 8) de sfbgli. Estes módulos (b/a)4 e (b/a)6 serão purificados e caracterizados quanto a sua atividade catalítica e estrutura terciária. Deste modo, o projeto aprofundará o entendimento sobre o "funcionamento" das beta-glicosidases e de enzimas com dobramento (b/a)8 barril. (AU)